ADN recombinant — définition ?
Molécule d’ADN construite en laboratoire à partir de sources multiples.
Vecteurs plasmidiques — rôle ?
Support pour insérer et cloner des fragments d’ADN.
Banque génomique — objectif ?
Représenter tout le génome d’un organisme dans une collection de vecteurs.
ADNc — synthèse ?
ADN complémentaire synthétisé à partir de l’ARNm.
Insertion ADNc — méthode ?
Dans un vecteur plasmidique pour créer un clone recombinant.
Organisation du génome humain — caractéristique ?
Organisation répétée et présence de pseudogènes.
Vecteurs pour grands inserts — exemple ?
BAC, capables de cloner jusqu’à 2000 kb.
PCR — principe ?
Amplification exponentielle d’une séquence spécifique d’ADN.
Amorces PCR — conception ?
18-25 nt, GC 45-55%, Tm proche.
Milieu PCR — composition ?
dNTP, amorces, ADN polymérase thermostable, tampon, ADN matrice.
Applications PCR — autres ?
RT-PCR, qPCR, PCR multiplex, amplification isotherme.
Protéines recombinantes — production ?
Exprimer un gène dans un hôte pour isoler la protéine.
Clonage moléculaire — but ?
Conserver et amplifier une séquence d’ADN d’intérêt.
Banque d’ADNc — construction ?
Insérer des ADNc dans vecteur pour représenter l’expression génique.
Techniques de criblage — exemple ?
Hybridation moléculaire avec sonde marquée.
PCR — étape clé ?
Cycles de dénaturation, hybridation, extension.
Amorces — spécificité ?
Se lient à la séquence cible avec Tm optimisée.
PCR — utilisations ?
Séquençage, clonage, quantification, étude d’expression.
Vérification clone — méthode ?
Digestion par restriction, électrophorèse, séquençage.
Insertion ADN dans vecteur — étape ?
Ligation entre insert et vecteur digérés.
Construction banque génomique — taille ?
Définie par la taille du génome et des inserts.
Amorces pour séquences inconnues — stratégie ?
Utiliser des amorces dégénérées ou RACE PCR.
PCR — erreur fréquente ?
Mauvaise conception amorces ou Tm non adapté.
Protéines recombinantes — purification ?
Chromatographie, affinity, filtration.
Testez vos connaissances avec un QCM de 12 questions sur Introduction au clonage moléculaire.
1. Qu'est-ce que l'ADN recombinant ?
2. Comment utilise-t-on un milieu LB agar contenant ampicilline, X-Gal et IPTG pour identifier les clones recombinants lors d'un clonage avec un vecteur plasmidique traditionnel ?
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