Qu'impose la technologie de l'ADN recombinant ?
De combiner des séquences d'ADN et de les utiliser dans de nouveaux contextes biologiques.
Quelle est la première étape d'une stratégie d'ADN recombinant ?
Isoler une séquence d'intérêt.
Que fait-on après avoir combiné l'insert avec un squelette vectoriel ?
Introduire la molécule recombinante dans une cellule hôte.
Quelle est la dernière étape dans une stratégie d'ADN recombinant ?
Sélectionner, amplifier et analyser le clone recombinant.
Qu'est-ce qu'un insert en ADN recombinant ?
Le fragment d'ADN d'intérêt destiné à être introduit dans un vecteur.
Dans quels domaines s'appliquent l'ADN recombinant ?
La médecine, la recherche, la production industrielle et la biologie synthétique.
Qu'est-ce qu'un vecteur de clonage ?
Une molécule d’ADN conçue pour porter un fragment d’ADN étranger et être maintenue dans une cellule hôte compatible.
Quels éléments composent l’architecture minimale d’un vecteur de clonage ?
Une origine de réplication, un marqueur de sélection et une région de clonage.
Quel rôle joue l’origine de réplication dans un vecteur ?
Elle maintient le vecteur dans l’hôte.
Que détermine l’origine de réplication en plus du maintien du vecteur ?
Son nombre de copies, son spectre d’hôtes et sa compatibilité avec d’autres plasmides.
Quelle est la différence entre sélection et screening dans le clonage ?
La sélection identifie les cellules portant le vecteur, le screening distingue les clones avec l’insert correct.
Qu'est-ce qu'un site de clonage multiple (MCS) ?
Une courte région d’ADN contenant plusieurs sites de restriction uniques pour insérer un fragment.
Quels éléments faut-il examiner pour lire une carte vectorielle ?
Le nom, la taille, l'origine de réplication, l'hôte, le marqueur de sélection, le MCS, les sites uniques et les éléments optionnels.
Quelle différence principale existe entre vecteur à haut et faible nombre de copies ?
Le haut nombre de copies fournit plus d'ADN mais est moins stable qu'un faible nombre de copies.
Quel est le premier critère pour choisir un vecteur ?
La capacité d'insertion.
Quels autres critères influencent le choix d'un vecteur ?
L'hôte, le but expérimental, la sélection et la validation.
Quel type de vecteur convient pour un insert inférieur à 10 kb ?
Un plasmide.
Quel vecteur permet de maintenir stable un grand fragment génomique d'environ 300 kb ?
Un BAC.
Quelle est la taille approximative de pUC18 ?
Environ 2,7 kb.
Quelle résistance antibiotique porte pUC18 ?
La résistance à l’ampicilline.
Que contient le MCS de pUC18 ?
Un MCS inséré dans le fragment lacZα.
Que signifie une colonie blanche après insertion dans le MCS de pUC18 ?
C’est une candidate recombinante.
Comment confirmer une colonie recombinante blanche ?
Par PCR, digestion de restriction ou séquençage.
Qu’est-ce qu’un phagemide ?
Un vecteur hybride plasmidique et phagique produisant de l’ADN simple brin avec un phage auxiliaire.
Quelle taille de fragments peuvent accueillir les cosmides ?
Environ 23 à 45 kb.
Quels éléments permettent aux YAC de maintenir de grands fragments ?
Une origine de levure, un centromère et des télomères.
Qu'est-ce qu'une endonucléase de restriction ?
Une enzyme qui reconnaît une séquence spécifique et clive l'ADN double brin.
Quelle est la différence entre enzymes de type I, IIP et IIS ?
Type I coupe loin du site, IIP dans ou près d'un site palindromique, IIS à l'extérieur d'un site asymétrique.
Qu'est-ce qui caractérise une extrémité franche ?
Elle se termine au même endroit sur les deux brins d'ADN.
Qu'est-ce qui caractérise une extrémité cohésive ?
Elle possède un surplomb simple brin en 5’ ou en 3’.
Quelle est la fréquence d'apparition d'un site de 4 bases dans une séquence aléatoire ?
Environ une fois tous les .
Quelle est la fréquence d'apparition d'un site de 6 bases dans une séquence aléatoire ?
Environ une fois tous les .
Quelle est la fréquence d'apparition d'un site de 8 bases dans une séquence aléatoire ?
Environ une fois tous les .
Que catalyse l'ADN ligase ?
La formation d'une liaison phosphodiester entre extrémités d'ADN adjacentes.
Quelle source d'énergie utilise la ligase T4 ?
L'ATP.
Quel effet a la phosphatase alcaline sur les extrémités 5’ du vecteur ?
Elle retire les phosphates 5’ et réduit la recircularisation du vecteur.
Un insert phosphorylé peut-il former des jonctions avec un vecteur traité à la phosphatase alcaline ?
Oui, il peut encore former des jonctions.
Que synthétise une ADN polymérase ?
L'ADN à partir d'une amorce portant un 3’-OH.
Que peut faire une ADN polymérase avec des extrémités 3’ récessives ?
Elle peut combler ces extrémités.
Quel rôle joue la ligase dans un clonage ?
Elle joint les fragments d'ADN préparés.
Quelles étapes précèdent la ligation dans un clonage ?
Préparation du vecteur et de l’insert, création ou modification des extrémités.
Qu'est-ce qu'une enzyme de type IIS reconnaît ?
Une séquence asymétrique.
Que fait une enzyme de type IIS après reconnaissance ?
Elle coupe à une distance définie à l’extérieur de la séquence reconnue.
Quel avantage offre la coupure des enzymes de type IIS pour l'assemblage ?
Elle permet de déterminer des surplombs avec des bases adjacentes choisies par l’utilisateur.
Quelles sont les étapes principales de l’assemblage Golden Gate ?
Flanquer par sites IIS, digérer, apparier surplombs, ligaturer fragments.
Que devient le produit final dans un assemblage Golden Gate correctement réalisé ?
Les sites de reconnaissance des enzymes IIS sont supprimés.
Pourquoi le produit final ne peut-il plus être recoupé par les enzymes IIS ?
Parce que les sites de reconnaissance ont été éliminés.
Quelle différence principale existe entre clonage classique et Golden Gate ?
Le clonage classique utilise des sites disponibles et assemble un insert à la fois, Golden Gate conçoit les surplombs et assemble plusieurs parties ordonnées.
Que fait Golden Gate aux sites de reconnaissance dans le produit final ?
Il élimine généralement les sites de reconnaissance du produit.
Quelles étapes vérifie un plan de clonage défendable ?
Il vérifie l’architecture du vecteur, les contraintes de l’insert, les extrémités, les enzymes d’assemblage et la validation.
Quels critères influencent le choix d’un vecteur ?
La taille, la stabilité, la toxicité de l’insert, l’hôte, le but, le marqueur et la validation.
Quelle stratégie est adaptée pour assembler quatre modules dans un ordre défini sans conserver les sites ?
La stratégie Golden Gate est appropriée.
Quels moyens permettent de distinguer le construit final du bruit de fond lors de la validation ?
Le screening, la PCR, la digestion de restriction ou le séquençage.
Teste tes connaissances avec un QCM de 23 questions sur Architecture des vecteurs et clonage.
1. Que permet principalement la technologie de l’ADN recombinant ?
2. Quelle succession décrit correctement une stratégie d’ADN recombinant ?
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