★ À maîtriser
📌 Les cellules de culture peuvent provenir de cellules isolées en suspension dans des liquides biologiques ou de cellules prélevées dans des organes puis séparées les unes des autres.
Compléments
La culture cellulaire est utilisée pour:
Les exemples de cellules tissulaires comprennent:
Séparer les cellules → obtenir une culture exploitable
★ À maîtriser
📌 Le matériel acheté stérile peut être utilisé directement, tandis que le matériel restant doit être autoclavé et que les milieux non stériles doivent être filtrés sur une membrane de porosité 0,22 μm.
Compléments
PSM protège les cellules et l’opérateur ; l’autoclave stérilise le matériel
Les paramètres essentiels sont:
Les cultures cellulaires sont le plus souvent incubées à 37 °C, avec 90 % d’humidité et 5 % de CO₂.
📌 Le CO₂ forme avec les ions bicarbonate HCO₃⁻ du milieu un système tampon qui contribue au maintien du pH.
37–90–5 : 37 °C, 90 % d’humidité, 5 % de CO₂
★ À maîtriser
📌 Les lymphocytes peuvent rester en suspension, tandis que d’autres cellules forment une monocouche en adhérant au verre, au plastique ou à une matrice extracellulaire.
Les cellules circulantes sont séparées grâce à leur différence de densité par un gradient de Ficoll et une centrifugation, ou grâce à un trieur cellulaire.
La dissociation utilise:
Compléments
📌 La culture organotypique utilise un fragment de tissu dont les cellules se développent à sa surface, tandis que la dissociation produit une suspension de cellules séparées.
Ficoll pour les cellules circulantes ; explant ou dissociation pour les tissus
★ À maîtriser
📌 Le repiquage est réalisé lorsque le milieu est appauvri en nutriments ou lorsque les cellules sont confluentes et forment un tapis cellulaire.
Pour repiquer des cellules adhérentes, le tapis cellulaire est d’abord dissocié par la trypsine, une autre enzyme protéolytique ou un agent liant le Ca²⁺.
Après environ 30 à 60 mitoses, les cellules cessent de se multiplier et meurent par apoptose, phénomène associé à la limite de Hayflick découverte par Leonard Hayflick en 1965.
Compléments
Culture primaire → repiquages → sénescence ou lignée immortelle
★ À maîtriser
Pour congeler les cellules, une suspension de 3 à 4 × 10⁶ cellules par mL en phase exponentielle est mélangée au DMSO, refroidie lentement à −40 °C à raison de 1 ou 4 °C par minute, puis placée dans l’azote liquide; la décongélation est rapide à 37 °C, suivie d’un lavage et d’un contrôle de viabilité.
Les besoins cellulaires comprennent:
Compléments
★ À maîtriser
📌 La transfection transitoire est analysée entre 24 et 72 heures puis le plasmide est perdu en quelques jours, tandis que la transfection stable est maintenue à long terme grâce à l’intégration chromosomique de l’ADN.
Compléments
Les réactifs chimiques comprennent:
Les méthodes physiques comprennent: la microinjection, l’électroporation, la propulsion de microprojectiles contenant de l’ADN
Transfection transitoire : plasmide perdu ; transfection stable : ADN intégré
★ À maîtriser
La surexpression d’une protéine repose sur la transfection d’un ADNc codant pour cette protéine, éventuellement associé à une étiquette formant une protéine de fusion comme GFP, HA, flag ou c-myc.
L’activité d’un promoteur est étudiée en le reliant à un gène rapporteur comme la galactosidase ou la luciférase, puis en mesurant le signal in situ ou l’activité enzymatique dans un lysat protéique.
L’inhibition de l’expression d’un gène peut être obtenue par interférence ARN avec de petits ARN double brin ou un hairpin RNAi, conduisant à la dégradation de l’ARNm ciblé ou à l’inhibition de sa traduction.
La préparation d’un ADN à transfecter consiste à construire un plasmide, à le transformer dans une bactérie pour l’amplifier, puis à le purifier avant la transfection.
Compléments
Une transfection stable permet d’isoler des clones par dilutions limites et de sélectionner ceux qui portent l’ADN transfecté grâce à la résistance à un antibiotique, généralement après 3 à 4 semaines.
Un plasmide d’expression peut contenir:
Construire → amplifier dans la bactérie → purifier → transfecter → analyser
Types de culture cellulaire
| Type | Principe | Résultat |
|---|---|---|
| Culture primaire | Première mise en culture de cellules issues d’un prélèvement | Prolifération limitée |
| Culture secondaire | Repiquage de cellules dans un milieu neuf | Maintien de la culture |
| Lignée cellulaire | Population capable de divisions illimitées | Prolifération à long terme |
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1. Concernant les fondements et les sources cellulaires, cochez la (les) proposition(s) exacte(s) :
2. À propos de la stérilité et du matériel de culture :
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Qu'est-ce que la culture cellulaire ?
Faire croître des cellules hors de l’organisme.
Pour quelles applications utilise-t-on la culture cellulaire ?
Pour la recherche fondamentale, les études chromosomiques, la production d’hybridomes et les études toxicologiques.
Quelles sont les deux origines possibles des cellules de culture ?
Cellules isolées en suspension ou cellules prélevées dans des organes puis séparées.
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