Qu'est-ce que la culture cellulaire ?
Faire croître des cellules hors de l’organisme.
Pour quelles applications utilise-t-on la culture cellulaire ?
Pour la recherche fondamentale, les études chromosomiques, la production d’hybridomes et les études toxicologiques.
Quelles sont les deux origines possibles des cellules de culture ?
Cellules isolées en suspension ou cellules prélevées dans des organes puis séparées.
Qu'est-ce qu'un tissu ?
Un ensemble de cellules.
Qu'est-ce qu'un poste de sécurité microbiologique ?
Un poste de sécurité microbiologique est une hotte à flux laminaire permettant de travailler stérilement sans flamme.
Que protège un poste de sécurité microbiologique ?
Il protège les cellules du milieu extérieur et l’opérateur.
Comment utiliser le matériel acheté stérile ?
Le matériel acheté stérile peut être utilisé directement.
Que doit-on faire du matériel restant non stérile ?
Le matériel restant doit être autoclavé.
Comment stériliser les milieux non stériles ?
Les milieux non stériles doivent être filtrés sur une membrane de porosité 0,22 μm.
De quoi sont principalement faites les boîtes de culture ?
Les boîtes de culture sont principalement en plastique à fond plat.
Quelle caractéristique ont les bouchons des boîtes de culture ?
Les bouchons permettent les échanges gazeux.
Quels sont les paramètres physico-chimiques essentiels d’une culture cellulaire ?
La température, l’hygrométrie et le pH.
À quelle température sont généralement incubées les cultures cellulaires ?
À 37 °C.
Quel taux d’humidité est utilisé pour l’incubation des cultures cellulaires ?
90 % d’humidité.
Quel pourcentage de CO₂ est utilisé dans l’incubation des cultures cellulaires ?
5 % de CO₂.
Quel système tampon maintient le pH dans une culture cellulaire ?
Le système CO₂/bicarbonate HCO₃⁻.
Quelle différence de comportement ont les lymphocytes par rapport à d'autres cellules en culture ?
Les lymphocytes restent en suspension alors que d'autres cellules forment une monocouche adhérente.
Comment sépare-t-on les cellules circulantes selon leur densité ?
Par un gradient de Ficoll et une centrifugation.
Quel autre outil permet de séparer les cellules circulantes ?
Un trieur cellulaire.
Quels procédés combinent la dissociation d'un organe ?
Une fragmentation mécanique et l'action d'enzymes protéolytiques.
Quelles enzymes protéolytiques sont utilisées pour dissocier un organe ?
La trypsine et la collagénase.
Quel agent chimique lie le Ca²⁺ lors de la dissociation d'un organe ?
L'EDTA.
Quelle différence y a-t-il entre culture organotypique et dissociation cellulaire ?
La culture organotypique conserve un fragment de tissu, la dissociation produit une suspension de cellules.
Qu'est-ce que le repiquage en culture cellulaire ?
Le transfert d'une partie des cellules dans un milieu neuf.
Quand réalise-t-on un repiquage en culture cellulaire ?
Quand le milieu est appauvri en nutriments ou les cellules sont confluentes.
Comment dissocie-t-on un tapis cellulaire pour repiquer des cellules adhérentes ?
Avec la trypsine, une autre enzyme protéolytique ou un agent liant le Ca²⁺.
Comment varie la dissociation enzymatique selon la température ?
Elle est plus douce et lente à 4 °C qu'à 37 °C.
Pourquoi doit-on contrôler l'action enzymatique à 37 °C ?
Pour éviter l'attaque des protéines membranaires.
Que se passe-t-il après 30 à 60 mitoses selon la limite de Hayflick ?
Les cellules cessent de se multiplier et meurent par apoptose.
Qui a découvert la limite de Hayflick et en quelle année ?
Leonard Hayflick en 1965.
Qu'est-ce qu'une lignée cellulaire ?
Une population de cellules capable d’un nombre illimité de divisions en culture.
Quelle est la première lignée cellulaire d’origine cancéreuse ?
La lignée HeLa.
En quelle année la lignée cellulaire HeLa a-t-elle été établie ?
En 1952.
Quel est le nombre de cellules par mL pour congeler une suspension cellulaire ?
3 à 4 × 10⁶ cellules par mL.
À quelle vitesse doit-on refroidir lentement les cellules pour congélation ?
À raison de 1 ou 4 °C par minute jusqu’à −40 °C.
Quelle est la température de décongélation rapide des cellules ?
37 °C.
Quels sont les besoins cellulaires en milieu de culture ?
Eau, ions minéraux, source de carbone et énergie, acides aminés, vitamines, oxygène, CO₂, pH proche de 7,4, température de 37 °C.
Qu'est-ce que la transfection en biologie cellulaire ?
Le transfert de séquences d'ADN ou d'ARN dans une cellule eucaryote.
Quels réactifs chimiques sont utilisés pour la transfection ?
Le phosphate de calcium, le DEAE-dextran et les liposomes artificiels.
Quelles méthodes physiques servent à la transfection ?
La microinjection, l’électroporation et la propulsion de microprojectiles.
Quelle caractéristique distingue la transfection transitoire ?
Elle est analysée entre 24 et 72 heures puis le plasmide est perdu en quelques jours.
Qu'est-ce qui maintient la transfection stable à long terme ?
L’intégration chromosomique de l’ADN.
Sur quoi repose la surexpression d'une protéine en transfection ?
Sur la transfection d'un ADNc codant pour cette protéine.
Comment étudie-t-on l'activité d'un promoteur ?
En le reliant à un gène rapporteur et en mesurant son signal ou activité.
Comment inhibe-t-on l'expression d'un gène par interférence ARN ?
Par de petits ARN double brin ou hairpin RNAi qui dégradent l'ARNm ou inhibent sa traduction.
Comment isole-t-on des clones après une transfection stable ?
Par dilutions limites et sélection avec un antibiotique après 3 à 4 semaines.
Quelles étapes comprend la préparation d'un ADN à transfecter ?
Construire un plasmide, le transformer en bactérie, puis le purifier.
Quels éléments peut contenir un plasmide d'expression ?
Un promoteur, site de clonage multiple, polyadénylation, origines de réplication bactérienne et eucaryote, et un gène de résistance.
Teste tes connaissances avec un QCM de 14 questions sur Culture cellulaire et transfection.
1. Concernant les fondements et les sources cellulaires, cochez la (les) proposition(s) exacte(s) :
2. À propos de la stérilité et du matériel de culture :
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