QCM : Culture cellulaire et transfection — 14 questions

Explication

La culture cellulaire correspond à la croissance de cellules hors de l’organisme. Les cellules peuvent être isolées d’emblée dans des liquides biologiques ou séparées à partir d’organes, et cette technique sert notamment aux études toxicologiques.

Explication

Le poste de sécurité microbiologique permet un travail stérile sans flamme, tout en protégeant les cellules et l’opérateur. Le matériel restant est autoclavé, tandis que les milieux non stériles sont filtrés sur une membrane de $0{,}22\ \mu\text{m}$.

Explication

La température, l’hygrométrie et le pH sont les paramètres physico-chimiques essentiels d’une culture cellulaire. L’hygrométrie limite l’évaporation du milieu, tandis que le pH dépend notamment du système tampon.

Explication

Les lymphocytes peuvent rester en suspension, alors que les cellules adhérentes s’attachent au support et forment une monocouche. La culture organotypique conserve un fragment tissulaire, contrairement à la dissociation qui produit des cellules séparées.

Explication

Le gradient de Ficoll et la centrifugation séparent les cellules selon leur densité. Le trieur cellulaire repose sur un tri instrumenté, tandis que la dissociation enzymatique concerne l’obtention d’une suspension à partir d’un organe.

Explication

La dissociation associe une fragmentation mécanique à des enzymes protéolytiques et à des agents liant le calcium. La trypsine et la collagénase sont des enzymes utilisables, tandis que l’EDTA lie le Ca²⁺.

Explication

Le repiquage devient nécessaire lorsque le milieu est appauvri en nutriments ou lorsque les cellules sont confluentes. La confluence correspond à un tapis cellulaire, tandis que l’appauvrissement concerne les nutriments du milieu.

Explication

Une lignée cellulaire est une population capable d’un nombre illimité de divisions en culture. La congélation est lente et utilise du DMSO avant le placement dans l’azote liquide, tandis que la décongélation est rapide à 37 °C.

Explication

La congélation utilise une suspension de 3 à 4 × 10⁶ cellules par mL en phase exponentielle, avec du DMSO, un refroidissement lent puis l’azote liquide. La décongélation est rapide à 37 °C et suivie d’un lavage et d’un contrôle de viabilité.

Explication

La transfection correspond à l’introduction d’ADN ou d’ARN dans une cellule eucaryote afin d’utiliser sa machinerie cellulaire. La transduction repose, elle, sur des particules virales et ne doit pas être confondue avec la transfection.

Explication

La surexpression repose sur la transfection d’un ADNc codant la protéine d’intérêt, avec une éventuelle étiquette comme GFP, HA, flag ou c-myc. Les autres propositions attribuent à tort cette application à un ARN interférent, à un promoteur ou à une séquence non codante.

Explication

L’activité d’un promoteur est étudiée en le reliant à un gène rapporteur, puis en mesurant un signal ou une activité enzymatique. La galactosidase et la luciférase sont les rapporteurs, tandis que le promoteur contrôle leur expression.

Explication

L’interférence ARN utilise de petits ARN double brin ou un hairpin RNAi pour réduire l’expression d’un gène. Elle peut provoquer la dégradation de l’ARNm ciblé ou inhiber sa traduction ; un ADNc transfecté sert au contraire à produire une protéine.

Explication

La préparation d’un ADN transfectable suit une séquence comprenant la construction d’un plasmide, son amplification bactérienne, puis sa purification. La sélection de clones résistants intervient dans une transfection stable, mais ne constitue pas cette préparation initiale de l’ADN.