Fiche de révision : Ensemencement et observation des bactéries

📋 Plan du Cours

1. Traçabilité des cultures
2. Ensemencement et asepsie
3. Contamination et hygiène
4. Cultures en milieu liquide
5. Coloration de Gram
6. Formes et groupements bactériens
7. Observation à l’état frais

📖 1. Traçabilité des cultures

★ À maîtriser

• L’étiquette indique :
  • les initiales
  • la date
  • le nom du milieu
  • le nom du micro-organisme ou du prélèvement
  • la durée d’incubation
  • la température d’incubation

Compléments

• Les boîtes de culture sont incubées à l’envers à 30 °C.

📖 2. Ensemencement et asepsie

🔑 Notions clés & Définitions

• Ensemencement : Introduction d’un inoculum dans un milieu de culture stérile.
• Étuve : Enceinte thermostatée utilisée pour l’incubation.

★ À maîtriser

• Le travail aseptique consiste à préparer les gestes et le matériel, marquer les boîtes et les tubes, désinfecter le poste en vaporisant puis en essuyant le produit après l’avoir laissé agir, et organiser le poste de travail.

📌 Lors d’un travail aseptique, seul le micro-organisme étudié doit être introduit dans le milieu stérile.

Compléments

• L’inoculum est transféré dans le milieu à l’aide d’une anse ou d’une pipette Pasteur.

• Un bec Bunsen allumé crée autour de lui un cône de stérilité utilisé pour travailler aseptiquement.

💡 Astuce mémo

Le bec Bunsen allumé crée un cône de stérilité → il limite les contaminations.

📖 3. Contamination et hygiène

★ À maîtriser

• Les tests d’ambiance indiquent une contamination très forte (+++) des doigts non lavés, forte (++) de l’air ambiant, simple (+) des bijoux, des cheveux, des doigts lavés et non essuyés, des doigts lavés et essuyés et d’une paillasse non désinfectée, et une absence de contamination (—) sur une paillasse désinfectée.

• Les mesures de prévention indiquées sont :

  • travailler en zone d’asepsie
  • enlever les bijoux
  • attacher les cheveux
  • se laver les mains
  • désinfecter la paillasse

Compléments

• Les bonnes pratiques d’hygiène de laboratoire permettent d’éviter les contaminations.

💡 Astuce mémo

Doigts non lavés : +++; paillasse désinfectée : absence de contamination.

📖 4. Cultures en milieu liquide

🔑 Notions clés & Définitions

• Turbidité : Trouble plus ou moins intense d’un milieu liquide de culture.
• Pellicule : Masse de cellules flottant à la surface du bouillon et formant un voile.
• Dépôt : Sédiment plus ou moins abondant, coloré ou non, qui se trouve au fond du tube.

📝 Points essentiels

• Escherichia coli et Proteus mirabilis présentent un trouble lorsqu’ils sont cultivés en milieu liquide.

💡 Astuce mémo

Visualiser le bouillon : trouble dans le liquide, voile à la surface, dépôt au fond.

📖 5. Coloration de Gram

🔑 Notions clés & Définitions

• Coloration de Gram : Coloration différentielle fondée sur les différences de composition de la paroi des bactéries.

★ À maîtriser

• 🔄 La préparation et la coloration suivent ces étapes :
  1. Réaliser un frottis, le sécher et le fixer à l’éthanol jusqu’à évaporation complète.
  2. Recouvrir de violet de gentiane pendant 1 minute et rincer rapidement à l’eau.
  3. Recouvrir de lugol pendant 1 minute et rincer à l’eau.
  4. Rincer à l’alcool puis à l’eau.
  5. Recouvrir de safranine pendant 1 minute et rincer à l’eau.
  6. Éponger la lame et observer à l’objectif ×100 avec de l’huile à immersion.

📌 Pendant la décoloration, la paroi des bactéries Gram positives empêche l’alcool de pénétrer dans le cytoplasme et celles-ci restent violettes, tandis que l’alcool pénètre dans les bactéries Gram négatives, dissout le complexe violet de gentiane-lugol et laisse leur cytoplasme incolore.

📌 La safranine pénètre dans le cytoplasme de toutes les bactéries, mais les bactéries Gram positives ne la fixent pas alors que les bactéries Gram négatives la fixent et deviennent roses.

Compléments

• Le violet de gentiane traverse la paroi de toutes les bactéries et colore leur cytoplasme en violet, puis le lugol fixe le violet de gentiane sur les structures cytoplasmiques comme mordant.

• Les exemples de morphologie et de Gram sont :

  • Bacillus subtilis : bacille Gram positif isolé ou en chaînette
  • Staphylococcus aureus : coque Gram positif isolé ou en amas
  • Escherichia coli : coccobacille Gram négatif isolé ou en amas

💡 Astuce mémo

Violet-gentiane et lugol → alcool → safranine.

📖 6. Formes et groupements bactériens

★ À maîtriser

• Les formes bactériennes décrites sont : les coques régulières sphériques, les coques à faces aplaties ou à faces concaves, les coccobacilles, intermédiaires entre coque et bacille, les bacilles à bouts carrés, ronds ou effilés, en massue ou en haltère, les vibrions en virgule, les formes spiralées, dont les spirochètes

Compléments

• Les coques peuvent être groupés en :

  • formes isolées
  • diplocoques
  • chaînettes
  • grappes ou amas

• Les bacilles peuvent être groupés en :

  • formes isolées
  • diplobacilles
  • chaînettes
  • paquets d’épingles
  • palissades

📖 7. Observation à l’état frais

🔑 Notions clés & Définitions

• État frais : Méthode permettant d’observer des micro-organismes vivants, notamment leur forme et leur mobilité.

★ À maîtriser

• 🔄 La réalisation d’un état frais suit ces étapes :
  1. Déposer une goutte de culture sur une lame.
  2. Recouvrir la goutte d’une lamelle sans faire déborder la culture.
  3. Observer à l’objectif ×40.
  4. Noter la forme et le type de mobilité.

📌 Une ciliature péritriche est associée à des mouvements lents, hésitants et sinueux avec des changements fréquents de direction, tandis qu’une ciliature polaire est associée à des mouvements plus ou moins rapides et rectilignes.

Compléments

• Les ciliatures polaires comprennent les ciliatures monotriche, lophotriche et amphitriche.

• Les exemples d’observation à l’état frais sont :

  • Bacillus subtilis : bacille immobile
  • Staphylococcus aureus : coque immobile
  • Escherichia coli : coccobacille à ciliature péritriche

💡 Astuce mémo

Ciliature péritriche : mouvements sinueux ; ciliature polaire : mouvements plus rectilignes.