Qu'est-ce que la PCR ?
Une technique de réplication ciblée de l’ADN in vitro.
En quelle année Kary Mullis a-t-il mis au point la PCR ?
En 1985.
Pour quel prix Kary Mullis a-t-il été récompensé en 1993 ?
Le prix Nobel de chimie.
Combien de copies d’ADN la PCR peut-elle produire en quelques heures ?
Environ un million de copies.
Qu'est-ce que la Taq polymérase ?
Une ADN polymérase thermorésistante extraite de Thermus aquaticus.
Quelle est la température optimale de polymérisation de la Taq polymérase ?
72 °C.
À quelle température la Taq polymérase résiste-t-elle lors de passages successifs ?
À 95 °C.
Quelles sont les trois étapes successives d'un cycle de PCR ?
Dénaturation, hybridation des amorces, puis élongation.
À quelle température se fait la dénaturation de l'ADN en PCR ?
À 92–94 °C.
Quelle température est optimale pour l'élongation avec la Taq polymérase ?
72 °C.
Quel rôle jouent les deux amorces oligonucléotidiques en PCR ?
Elles délimitent la région à amplifier et fournissent une extrémité 3’-OH.
Quelle est la longueur habituelle des amorces de PCR ?
De 18 à 24 nucléotides.
Quelles contraintes doivent respecter les amorces de PCR ?
Avoir des Tm comparables, ne pas être complémentaires entre elles, éviter les séquences répétées inversées.
Quels composants contient le milieu réactionnel de PCR ?
dNTP, ADN polymérase thermostable, MgCl2, tampon pH 8,5–9, ADN matrice, deux amorces.
Quel est le facteur d'amplification théorique après n cycles de PCR ?
Le facteur d'amplification est de copies.
Combien de cycles comporte généralement une PCR ?
Une PCR comporte généralement 20 à 45 cycles.
Combien d'amplicons produit une PCR de 30 cycles à 85 % de rendement ?
Elle produit environ un million d'amplicons en une heure.
Quelles sont les phases de la cinétique d'une PCR ?
La cinétique comprend une phase de bruit de fond, exponentielle, linéaire et de plateau.
Que font les thermocycleurs dans une PCR ?
Ils automatisent les variations de température pour dénaturation, hybridation et synthèse.
Quel rôle joue l'électrophorèse sur gel après une PCR ?
Elle vérifie la présence et la taille des amplicons.
Qu'associe la RT-PCR dans son procédé ?
La transcription inverse de l'ARN messager en ADNc puis une PCR.
Par quoi l'ADNc diffère-t-il de l'ARN ?
Par son désoxyribose et sa thymine à la place du ribose et de l'uracile.
Quelle base remplace l'uracile dans l'ADNc ?
La thymine remplace l'uracile dans l'ADNc.
Quelles sont les transcriptases inverses les plus utilisées ?
Celles du virus du myéloblastome aviaire (AMV) et du virus de la leucémie murine (MMLV).
Quelle est la première étape de la transcription inverse ?
Mélanger l'ARN et les amorces.
Que fait-on après le chauffage à 65 °C dans la transcription inverse ?
On effectue un refroidissement rapide.
Quels composants sont ajoutés avant l'incubation à 37–42 °C ?
La transcriptase inverse, des dNTP et le tampon.
Quelle différence principale existe entre PCR en point final et qPCR ?
La PCR en point final mesure l’ADN à la fin, la qPCR à chaque cycle.
Qu'est-ce que le Ct en qPCR ?
Le Ct est le nombre de cycles pour atteindre une fluorescence seuil.
Quelle différence y a-t-il entre quantification relative et absolue en qPCR ?
La relative compare les Ct, l’absolue utilise une droite standard.
Pour quelles analyses la qPCR est-elle utilisée ?
Pour l’expression génique, les mutations et le génotypage.
Qu'est-ce que le SYBR Green en qPCR ?
Un agent intercalant fluorescent lié à l'ADN double brin.
De quoi dépend la spécificité avec le SYBR Green ?
Uniquement des amorces utilisées.
Que vérifie une courbe de fusion en qPCR avec SYBR Green ?
Qu'un seul produit PCR a été généré.
Qu'est-ce qu'une sonde fluorescente ?
Un oligonucléotide avec un fluorochrome reporter et un quencher.
Quel est le rôle du quencher dans une sonde fluorescente ?
Il inhibe l'émission de fluorescence quand proche du reporter.
Que se passe-t-il dans le système TaqMan lors de l'élongation ?
La sonde hybridée est hydrolysée par l'ADN polymérase.
Quelle conséquence produit l'hydrolyse de la sonde dans TaqMan ?
La séparation du reporter et du quencher produit de la fluorescence.
Que permet le multiplexage avec des sondes fluorescentes ?
La détection simultanée de plusieurs cibles dans un même tube.
Qu'est-ce que le séquençage d'ADN ?
Déterminer l'ordre des nucléotides d'une molécule d'ADN.
Qu'est-ce qu'un ddNTP en séquençage ?
Un analogue dNTP sans groupement 3'-OH arrêtant l'élongation.
Combien de réactions avec ddNTP utilise la méthode de Sanger ?
Quatre réactions, chacune avec un ddNTP différent.
Comment lit-on la séquence sur un gel en méthode de Sanger ?
Du bas vers le haut du gel selon la taille des fragments.
Quelle est la relation entre la séquence Sanger et le brin matrice ?
La séquence Sanger est complémentaire du brin matrice.
La séquence Sanger est-elle identique à un brin de la double hélice ?
Oui, elle est identique à l'autre brin de la double hélice initiale.
Quelle différence de longueur de lecture entre séquenceurs automatiques et manuels ?
Automatiques lisent jusqu'à 1000 nucléotides, manuels 300.
Quelle innovation utilisent les séquenceurs automatiques pour différencier les ddNTP ?
Des ddNTP fluorescents de couleurs différentes.
En quelle année le premier génome humain complet a-t-il été publié ?
En 2008.
Quelle différence principale existe entre NGS de deuxième et troisième génération ?
La deuxième génération nécessite une fragmentation préalable, la troisième non.
Quelle technique les NGS combinent-elles pour réaliser des séquençages massivement parallèles ?
Elles combinent la PCR et les puces à ADN.
Combien de temps faut-il pour séquencer un génome humain entier aujourd'hui ?
Environ une dizaine d’heures.
Quel est le coût approximatif pour séquencer un génome humain entier actuellement ?
Environ 1000 euros.
Pourquoi les NGS nécessitent-ils des outils spécialisés de bio-informatique ?
Parce que leur volume de données est trop important pour une analyse manuelle.
Teste tes connaissances avec un QCM de 26 questions sur Méthodes d’analyse du génome.
1. Quelle caractéristique distingue principalement la PCR du clonage moléculaire ?
2. Quelle association entre la mise au point de la PCR et la récompense attribuée à Kary Mullis est correcte ?
Révisez le cours complet dans la fiche de révision de Méthodes d’analyse du génome.
Voir la fiche →Importe ton cours et l'IA génère des flashcards en 30 secondes.
Générateur de flashcards