Qu'est-ce que la culture cellulaire ?
Faire croître des cellules hors de leur organisme dans des conditions contrôlées.
Quelles étapes comprend la mise en culture des cellules ?
Isolement, placement en milieu adapté, puis prolifération si possible.
Comment sont cultivées les cellules circulantes ?
En suspension.
Comment sont cultivées les cellules organisées en tissu ?
Adhérentes à un support.
Quelle est la différence entre culture primaire et lignée cellulaire ?
La culture primaire vient d’un organisme et est sensible, la lignée peut être maintenue indéfiniment.
Que peut modifier le phénotype des lignées cellulaires ?
Les conditions de culture ou l’accumulation d’anomalies génétiques et chromosomiques.
Quel est l'effet de la modification du phénotype des lignées cellulaires ?
Réduction de la reproductibilité entre laboratoires.
Qu'est-ce qu'un anticorps ?
Une glycoprotéine soluble de type immunoglobuline fixant spécifiquement un antigène.
Qu'est-ce que l'épitope dans une interaction antigène-anticorps ?
La partie de l'antigène reconnue par l'anticorps.
Qu'est-ce que le paratope dans une interaction antigène-anticorps ?
La partie de l'anticorps qui interagit avec l'épitope.
Quelle est la caractéristique d'un anticorps monoclonal ?
Il provient d'un même clone de plasmocytes et reconnaît un même épitope.
Quelle est la caractéristique d'un anticorps polyclonal ?
Il provient de plusieurs clones et peut reconnaître plusieurs épitopes.
Quel est le principe de l'immunomarquage ?
Localiser une protéine en tissu avec un anticorps marqué visualisé au microscope.
Comment fonctionne l'immunohistochimie ?
Un anticorps couplé à une enzyme transforme un substrat incolore en produit coloré.
Quelle est la spécificité de l'immunofluorescence ?
Un anticorps couplé à un fluorochrome observé au microscope à fluorescence.
Qu'est-ce que la SDS-PAGE sépare chez les protéines ?
Leur poids moléculaire apparent.
Comment estime-t-on le poids moléculaire en SDS-PAGE ?
Grâce à des marqueurs de poids moléculaire connus.
Comment sont dénaturées les protéines lors de la SDS-PAGE ?
Par chauffage, SDS et β-mercaptoéthanol.
Quelle est la direction de migration des protéines en SDS-PAGE ?
Vers l’anode dans un gel.
Comment les protéines sont-elles révélées après SDS-PAGE ?
Sous forme de bandes, par exemple au bleu de Coomassie.
Comment le Western blot détecte-t-il une protéine d’intérêt ?
Grâce à un anticorps spécifique.
Quelle étape suit la SDS-PAGE dans le Western blot ?
Le transfert des protéines du gel vers une membrane de nitrocellulose.
Quel est le principe de l’immunoprécipitation ?
Précipiter une protéine avec ses partenaires associés pour les détecter.
Qu'est-ce que le fractionnement cellulaire ?
Une méthode qui sépare les organites pour les étudier séparément.
Quelles étapes comprend le fractionnement cellulaire ?
Lyse, centrifugation, recueil des culots, analyse des fractions.
Comment analyse-t-on les fractions obtenues après fractionnement ?
Par protéine marqueur, Western blot ou activité enzymatique.
Quel organite sédimente en premier lors de centrifugations successives ?
Les noyaux.
Quels organites sédimentent après les noyaux ?
Les mitochondries et lysosomes.
Quels organites sédimentent après les mitochondries et lysosomes ?
Les fragments de membrane plasmique et microsomes.
Quel organite sédimente en dernier lors de centrifugations successives ?
Les ribosomes.
Comment fonctionne la centrifugation en gradient de densité ?
Les organites migrent jusqu'à une zone de densité identique à la leur.
Qu'est-ce que la cytométrie en flux analyse automatiquement ?
Des cellules individuelles passant une à une devant un laser.
Que renseigne la diffusion axiale FSC en cytométrie en flux ?
La taille cellulaire.
Que renseigne la diffusion latérale SSC en cytométrie en flux ?
La granularité ou la structure cellulaire.
Quels sont les composants principaux de la cytométrie en flux ?
Un réseau fluidique, un banc optique avec laser, filtres et détecteurs, et un microprocesseur.
Que contient la phase G1 dans l'analyse du cycle cellulaire par cytométrie ?
Un ADN non dupliqué.
Que correspond la phase S dans l'analyse du cycle cellulaire ?
La réplication de l'ADN.
Que contient la phase G2/M dans l'analyse du cycle cellulaire ?
Un ADN dupliqué.
Quelle est la différence entre knock-in et knock-out ?
Le knock-in ajoute un gène, le knock-out l'inhibe.
Quel rôle joue la GFP dans une stratégie de knock-in ?
Elle rend une protéine repérable par fusion.
Qu'invalide un KO total ?
Un gène dans tout l’organisme définitivement.
Qu'invalide un KO conditionnel ?
Un gène à un moment choisi.
Qu'invalide un KO spécifique ?
Un gène seulement dans certains tissus ou types cellulaires.
Pourquoi un KO total peut-il être impossible ?
Parce que le gène est indispensable à la vie.
Comment le siRNA bloque-t-il l'expression d'un gène ?
Le siRNA s'associe à un ARNm complémentaire pour le dégrader.
Quelle est la limite de l'extinction par siRNA ?
Elle n'est pas totale et cible difficilement un type cellulaire précis.
Que fait la recombinase Cre dans la stratégie Cre-Lox ?
Elle excise un gène entouré de séquences loxP dans les cellules où elle est active.
Comment limiter le KO à un tissu spécifique avec Cre ?
Un promoteur spécifique contrôle l'expression de Cre dans ce tissu.
Qu'est-ce que CRISPR-Cas9 permet de faire sur l'ADN ?
Il permet une coupure spécifique de l'ADN pour modifier ou invalider un gène.
Comment CRISPR-Cas9 reconnaît-il l'ADN cible ?
Grâce à un ARN guide complémentaire et une séquence PAM.
Que provoque Cas9 après reconnaissance de l'ADN cible ?
Une coupure double brin de l'ADN.
Que sont les coupures off target réalisées par Cas9 ?
Des coupures d'ADN en dehors de la région ciblée.
Que peut faire une dCas9 non fonctionnelle sur un gène ?
Elle peut réprimer un gène sans couper l'ADN.
Que permet une dCas9 fusionnée à un activateur ?
D'augmenter l'expression d'un gène.
Que représentent les barres d'erreur sur un graphique ?
Une valeur accompagnée d'une incertitude comme l'écart-type.
Que signifient les étoiles sur un graphique comparant des groupes ?
Le niveau de significativité d'une différence entre groupes.
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1. Que permet d’analyser la cytométrie en flux ?
2. Lors de centrifugations successives, quel ordre de sédimentation des structures cellulaires est attendu ?
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