QCM : Méthodes d’étude des cellules et tissus — 25 questions

Explication

La cytométrie en flux analyse automatiquement des cellules individuelles entraînées une à une dans un flux liquide devant un laser, notamment pour les classer ou les trier. La séparation d’organites selon leur densité correspond au fractionnement cellulaire.

Explication

Les noyaux sédimentent d’abord, suivis des mitochondries et des lysosomes, puis des fragments membranaires et des microsomes, tandis que les ribosomes sédimentent en dernier. Cet ordre repose sur les différences de taille, de densité et de coefficient de sédimentation.

Explication

La mise en culture débute par l’isolement des cellules, suivi de leur placement dans un milieu adapté avec, si nécessaire, des facteurs de croissance et un support. La coloration, le transfert membranaire et la précipitation concernent d’autres méthodes expérimentales.

Explication

Le fractionnement cellulaire exploite les différences de densité et de sédimentation pour isoler les organites et les étudier séparément. L’analyse de cellules individuelles devant un laser relève de la cytométrie en flux, et non du fractionnement.

Explication

L’immunoprécipitation isole la protéine d’intérêt avec les protéines qui lui sont associées, lesquelles peuvent ensuite être analysées, notamment par Western blot. Le bleu de Coomassie, le transfert membranaire et la réaction enzymatique colorée décrivent d’autres méthodes.

Explication

En immunohistochimie, l’anticorps est couplé à une enzyme qui produit un composé coloré insoluble, tandis qu’en immunofluorescence il est associé à un fluorochrome observé en microscopie à fluorescence. Les autres associations attribuent à ces techniques des fonctions de séparation, de culture ou de précipitation.

Explication

Un knock-in introduit un gène ou une séquence génétique, tandis qu’un knock-out inhibe, invalide ou éteint un gène. L’invalidation d’un gène est donc associée au KO et non au KI.

Explication

Le SDS confère une charge négative aux protéines et les linéarise, ce qui permet une séparation principalement liée à leur taille apparente. La rupture des ponts disulfure est attribuée au β-mercaptoéthanol, tandis que la coloration et le transfert membranaire interviennent après la migration.

Explication

L’épitope est la région de l’antigène reconnue par l’anticorps, tandis que le paratope est la région de l’anticorps qui interagit avec elle. Inverser ces deux localisations constitue la confusion classique entre les deux notions.

Explication

Une culture primaire est issue d’un organisme pluricellulaire et demeure très sensible aux conditions de son environnement, alors qu’une lignée cellulaire peut être maintenue indéfiniment. Les autres propositions confondent cette distinction avec le mode de culture ou avec des notions d’immunologie.

Explication

En G1, l’ADN n’est pas encore dupliqué ; la phase S assure sa réplication ; en G2/M, la cellule possède un ADN dupliqué. Les autres propositions attribuent incorrectement la réplication ou l’état de duplication aux différentes phases.

Explication

La diffusion axiale FSC est principalement liée à la taille cellulaire, alors que la diffusion latérale SSC renseigne notamment sur la granularité ou la structure interne. Inverser ces associations constitue la confusion classique entre FSC et SSC.

Explication

La culture cellulaire consiste à maintenir et faire croître des cellules en dehors de leur organisme ou milieu d’origine, avec un contrôle des conditions expérimentales. L’observation dans l’organisme relève d’une approche in vivo et non de la culture cellulaire.

Explication

Le protocole comprend la lyse, la centrifugation, le recueil des culots et l’analyse des fractions à l’aide de marqueurs, d’un Western blot ou d’une activité enzymatique. Le tri laser appartient à la cytométrie en flux et ne décrit pas ce protocole.

Explication

Le siRNA s’apparie à un ARNm complémentaire, puis favorise sa dégradation, ce qui réduit fortement l’expression du gène. L’excision entre deux séquences loxP relève de la stratégie Cre-Lox et non du mécanisme du siRNA.

Explication

Un anticorps monoclonal est produit par un même clone de plasmocytes et cible un même épitope, alors qu’un anticorps polyclonal provient de plusieurs clones et peut reconnaître plusieurs épitopes. Le type de marqueur ou la technique utilisée ne définit pas le caractère monoclonal ou polyclonal.

Explication

Cre reconnaît les deux sites loxP et provoque l’excision du segment de gène situé entre eux dans les cellules où elle est active. La dégradation d’un ARNm correspond au siRNA, tandis que la coupure guidée par l’ARN relève de CRISPR-Cas9.

Explication

L’ARN guide complémentaire s’associe à Cas9 et permet la reconnaissance de l’ADN cible en présence d’une séquence PAM, suivie d’une coupure double brin. Une dCas9 dépourvue d’activité de coupure peut moduler l’expression, mais elle ne décrit pas le mécanisme de Cas9 fonctionnelle.

Explication

Un KO total invalide définitivement le gène dans tout l’organisme, tandis qu’un KO conditionnel est déclenché à un moment choisi et qu’un KO spécifique est limité à certains tissus ou types cellulaires. Ces catégories se distinguent donc par l’étendue ou le moment de l’invalidation, et non par l’ajout d’un gène.

Explication

Un anticorps est une glycoprotéine soluble appartenant aux immunoglobulines et capable de reconnaître spécifiquement un antigène. Une enzyme colorimétrique, un fragment d’antigène ou une méthode de séparation ne correspondent pas à cette définition.

Explication

Un promoteur spécifique du tissu peut restreindre l’expression de Cre aux cellules concernées, où l’excision du gène devient alors possible. La présence de sites loxP sans expression localisée de Cre ne suffit pas à limiter le KO à ce tissu.

Explication

Le Western blot combine une séparation préalable par SDS-PAGE avec une détection spécifique par anticorps, ce qui permet aussi d’estimer la masse moléculaire de la protéine ciblée. La séparation globale sans anticorps correspond à la SDS-PAGE, tandis que la localisation dans un tissu relève de l’immunomarquage.

Explication

Deux ARN guides peuvent encadrer une séquence et permettre son élimination, alors qu’une dCas9 non fonctionnelle module la répression ou l’activation sans couper l’ADN. Cas9 fonctionnelle, au contraire, réalise une coupure de l’ADN.

Explication

CRISPR-Cas9 réalise une coupure ciblée de l’ADN, ce qui peut permettre de modifier le génome ou d’invalider un gène. La dégradation de l’ARNm appartient au mécanisme du siRNA, tandis que l’excision entre sites loxP relève de Cre-Lox.

Explication

La SDS-PAGE sépare les protéines selon leur poids moléculaire apparent, que l’on peut estimer par comparaison avec des marqueurs de masse connue. La détection spécifique par anticorps relève du Western blot, tandis que la précipitation et la fluorescence correspondent à d’autres approches.