Fiche de révision : Observation et dénombrement cellulaires

📋 Plan du Cours

1. Objectifs et échantillons du TP
2. Calibration du microscope
3. Dénombrement de Saccharomyces cerevisiae
4. Identification des cellules sanguines
5. Estimation des cellules sanguines

📖 1. Objectifs et échantillons du TP

★ À maîtriser

• Le TP vise à acquérir des outils d’observation cellulaire, à réaliser des dénombrements et à estimer indirectement l’abondance d’organismes ou de types cellulaires dans des échantillons.

• Les deux échantillons fournis sont une suspension de Saccharomyces cerevisiae colorée au rouge neutre et des frottis de cellules sanguines humaines ou de Grenouille.

Compléments

• L’évaluation du TP a lieu pendant les 15 premières minutes de la séance de TP2 et prend la forme d’un QCM.

📖 2. Calibration du microscope

★ À maîtriser

• 🔄 La calibration suit trois étapes:

  1. Mesurer en pixels l’image d’un espace réel de 1 mm
  2. Calibrer le logiciel d’acquisition
  3. Déduire la surface correspondant à 1 mm²

• Pour les grossissements 40, 100 et 400, 1 mm correspond respectivement à 426,878 pixels, 993,564270 pixels et 3972 pixels.

Compléments

📐 Formule — La surface observée exprimée en pixels carrés est calculée en élevant au carré la longueur mesurée en pixels : $S_{40}=426^2$, $S_{100}=993^2$ et $S_{400}=3972^2$.

💡 Astuce mémo

Mesurer, calibrer, puis convertir l’image en surface réelle

📖 3. Dénombrement de Saccharomyces cerevisiae

📝 Points essentiels

• Saccharomyces cerevisiae intervient dans la fermentation de la bière, et une bière IPA doit contenir entre 10⁹ et 10¹² cellules L⁻¹ pour respecter la norme indiquée.

• 🔄 Le dénombrement des levures suit trois étapes:

  1. Observer une goutte d’environ 100 µL entre lame et lamelle
  2. Déterminer la taille des cellules
  3. Compter les cellules dans au moins 30 champs de surface connue

📌 Le nombre de cellules présentes dans le volume tridimensionnel de la goutte est assimilé au nombre de cellules présentes sous la surface bidimensionnelle de la lamelle.

• L’abondance des levures par litre est estimée en extrapolant le nombre moyen de cellules comptées dans les champs à la surface de la lamelle, puis au volume de la goutte et enfin à un litre de suspension.

💡 Astuce mémo

Comptage des champs → extrapolation à la lamelle → estimation par litre

📖 4. Identification des cellules sanguines

🔑 Notions clés & Définitions

• Cellules sanguines : Cellules libres et isolées qui baignent dans le plasma.

★ À maîtriser

📌 Chez les mammifères, les hématies sont anucléées et présentent une petite dépression centrale, tandis que chez les Poissons, Amphibiens, Reptiles et Oiseaux elles sont nucléées et ovales.

• Les hématies mesurent 6 à 8 µm et sont présentes à environ 4,5 à 6 × 10⁶ par mm³, tandis que les thrombocytes mesurent 2 à 4 µm et sont présents à 150 000 à 300 000 par mm³.

Compléments

• Les frottis sanguins minces sont colorés au May-Grünwald ou au Giemsa, ce dernier associant le bleu de méthylène et l’éosine.

• Les granulocytes neutrophiles, éosinophiles et basophiles mesurent respectivement 10 à 12 µm, 10 à 12 µm et 9 à 10 µm.

• Les lymphocytes mesurent 7 à 8 µm, les monocytes 14 à 20 µm et les thrombocytes 2 à 4 µm.

💡 Astuce mémo

Mammifères : hématies anucléées ; autres vertébrés cités : hématies nucléées et ovales

📖 5. Estimation des cellules sanguines

★ À maîtriser

• Les proportions indiquées sont de 45 à 70 % pour les granulocytes neutrophiles, de 1 à 3 % pour les granulocytes éosinophiles, de 0,2 à 1 % pour les granulocytes basophiles et de 20 à 40 % pour les lymphocytes.

• Les estimations du nombre d’hématies à observer sont:

  • 857 pour un granulocyte neutrophile
  • 20 000 pour un granulocyte éosinophile
  • 120 000 pour un granulocyte basophile
  • 1 500 pour un lymphocyte
  • 8 571 pour un monocyte
  • 20 pour un thrombocyte

• Le dénombrement des hématies et des plaquettes sur le frottis s’effectue en reprenant la technique utilisée pour Saccharomyces cerevisiae.

Compléments

• Les monocytes représentent 2 à 7 % des cellules sanguines indiquées dans le tableau, tandis que les thrombocytes sont dénombrés à 150 000 à 300 000 par mm³.

📊 Tableaux de synthèse

Caractéristiques des cellules sanguines