Quelles sont les quatre étapes de l'extraction des acides nucléiques ?
Lyse tissulaire/cellulaire, dénaturation des protéines, inactivation des nucléases, purification des acides nucléiques.
Quel est le pourcentage de pureté des acides nucléiques après extraction ?
Environ 60 % de pureté.
Comment se fait la lyse mécanique d'un tissu dense ?
Par broyage.
Quels agents sont utilisés pour la lyse cellulaire après broyage ?
Un détergent comme le SDS et/ou une enzyme comme la protéinase K.
Pourquoi les acides nucléiques absorbent-ils à 260 nm ?
À cause de leurs bases hétérocycliques.
Pourquoi les protéines absorbent-elles à 280 nm ?
Grâce à leurs acides aminés aromatiques.
Quel support est le plus utilisé pour l'électrophorèse des acides nucléiques?
Le gel d’agarose.
Selon quel critère l'électrophorèse sépare-t-elle les acides nucléiques?
Selon leur taille.
Comment s'exprime la taille des doubles brins en électrophorèse?
En paires de bases.
Comment s'exprime la taille des simples brins en électrophorèse?
En nucléotides.
Que sont les enzymes de restriction ?
Ce sont des nucléases qui coupent l’ADN double brin à un motif défini.
Qu'est-ce qui différencie un isoschizomère d'un néoschizomère ?
L'isoschizomère coupe de la même façon, le néoschizomère coupe différemment.
Quels types d'extrémités les enzymes de restriction peuvent-elles produire ?
Des extrémités franches ou cohésives avec 3’ ou 5’ sortantes.
Quand des enzymes de restriction sont-elles compatibles ?
Quand leurs coupures libèrent des extrémités pouvant être ligaturées.
Quelle différence existe entre RNAse A et RNAse H ?
RNAse A dégrade ARN simple ou double brin, RNAse H dégrade ARN dans un hybride ADN/ARN.
Quelle activité possède la Taq polymérase en plus de la polymérisation 5’→3’ ?
Une activité exonucléasique 3’→5’.
Quelle est la source naturelle de la Taq polymérase ?
Thermus aquaticus.
Que peut faire une ADN polymérase seule au début de la synthèse d’ADN ?
Elle ne peut pas commencer seule la synthèse d’ADN.
Quel est le rôle principal de la transcriptase inverse ?
Synthétiser un ADN complémentaire à partir d’une matrice d’ARN.
Comment une ligase relie-t-elle deux molécules d’ADN ?
En formant une liaison phosphodiester entre une extrémité 3’OH et une extrémité 5’P.
Qu'est-ce que la PCR en biologie moléculaire ?
Une réaction enzymatique de polymérisation en chaîne amplifiant un fragment spécifique d’ADN.
Quels composants contient le milieu de PCR ?
Une matrice d’ADN, deux amorces, une Taq polymérase, des dNTP et un tampon avec des sels de Mg2+.
Quelles étapes composent un cycle de PCR ?
Dénaturation à 94 °C, hybridation à 50–60 °C, polymérisation à 72 °C.
Quelle est la taille et la spécificité statistique des amorces de PCR ?
Des oligonucléotides simple brin d’environ 20 nucléotides, uniques statistiquement dans un génome.
De quoi dépend la température de fusion des amorces en PCR ?
De leur taille, séquence et de la quantité de sel du milieu.
Que caractérisent les phases latence, exponentielle et plateau en PCR ?
Latence : apparition des fragments, exponentielle : amplification préférentielle, plateau : appauvrissement des amorces et baisse d’activité enzymatique.
Quelle formule décrit la quantité d’ADN après n cycles de PCR à 100 % de rendement ?
Quel risque majeur la PCR présente-t-elle en cas de contamination par une molécule d'ADN ?
Une contamination par une seule molécule peut produire un faux positif.
Comment le laboratoire limite-t-il les contaminations lors de la PCR ?
En séparant pré-PCR, pièce PCR et post-PCR avec une marche en avant sans retour.
Qu'est-ce que la PCR multiplex ?
Une PCR qui amplifie plusieurs fragments simultanément dans un seul milieu.
Comment la PCR quantitative mesure-t-elle la quantité initiale de cible ?
En reliant le nombre de cycles pour entrer en phase exponentielle à la quantité initiale.
Quelle différence existe-t-il entre détection non spécifique et spécifique en PCR quantitative ?
La détection non spécifique utilise une molécule intercalante fluorescente, la spécifique une sonde complémentaire.
Comment isoler les acides nucléiques chargés négativement par chromatographie ?
Par chromatographie échangeuse d’ions avec une résine chargée négativement ou par chromatographie d’adsorption.
Que signifie l'hyperchromie en ADN ?
L'ADN simple brin absorbe plus que l'ADN double brin.
Quel type d'enzymes de restriction est le plus utilisé en laboratoire ?
Les enzymes de type II.
Quelle est la définition d'une unité d'activité d'enzyme de restriction ?
La quantité nécessaire pour couper 1 µg d’ADN de phage lambda à 37 °C en 1 heure.
Quelle est la spécificité de la DNAse I ?
Elle coupe après un nucléotide pyrimidine, T ou C.
Quelle ligase est la plus utilisée en laboratoire ?
La T4 DNA ligase.
Combien de cycles et combien de temps dure généralement une PCR ?
Environ 30 cycles en 1 heure 30.
Quel effet le sang peut-il avoir sur la PCR ?
Il peut contenir des inhibiteurs enzymatiques qui gênent la PCR.
Quelle est la caractéristique des sondes TaqMan en PCR quantitative ?
Ce sont des sondes ADN simple brin marquées par un reporter et un quencher.
Sur quel principe repose la PCR digitale ?
Le partitionnement de l’échantillon en 10 000 à 20 000 compartiments avec zéro ou une molécule cible.
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1. Concernant les étapes de l’extraction des acides nucléiques :
2. Parmi les propositions suivantes concernant le résultat d’une extraction d’acides nucléiques, la(les)quelle(s) est(sont) exacte(s) ?
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