Fiche de révision : Technique PCR et amplification de l’ADN

📋 Plan du Cours

1. Usages et principe de la PCR
2. Découverte et objectif de la PCR
3. Composition du mélange réactionnel
4. Étapes du cycle thermique
5. Amplification et interprétation du test

📖 1. Usages et principe de la PCR

🔑 Notions clés & Définitions

• PCR : Réaction enzymatique en chaîne qui amplifie un fragment ciblé d’ADN dans un thermocycleur.

★ À maîtriser

• La PCR est utilisée pour diagnostiquer des maladies, étudier des bactéries ou des virus, détecter des OGM et mener des recherches ou des analyses policières.

Compléments

• Lors d’un diagnostic, un échantillon prélevé, par exemple avec un écouvillon nasal, est traité pour en extraire le matériel génétique du micro-organisme et en conserver l’ADN à analyser.

💡 Astuce mémo

Une photocopieuse transforme un fragment d’ADN rare en nombreuses copies.

📖 2. Découverte et objectif de la PCR

★ À maîtriser

• Kary Mullis a mis au point la technique PCR en 1983 afin d’amplifier l’ADN disponible en très faible quantité.

Compléments

• En 1993, Kary Mullis a reçu le prix Nobel pour la découverte de la PCR.

• Avant la PCR, la faible quantité d’ADN disponible limitait les manipulations possibles.

📖 3. Composition du mélange réactionnel

🔑 Notions clés & Définitions

• Polymérase : Enzyme qui copie l’ADN au cours de la PCR.

★ À maîtriser

• Le mélange réactionnel de PCR contient :
  • l’ADN à copier
  • une polymérase
  • des nucléotides
  • des amorces
  • de l’eau
  • un liquide tampon

Compléments

• Les amorces sont de petits morceaux de nucléotides qui se fixent sur les brins d’ADN.

📖 4. Étapes du cycle thermique

★ À maîtriser

• 🔄 Un cycle de PCR comprend :

  1. la dénaturation
  2. l’hybridation
  3. l’élongation

• Lors de la dénaturation, le chauffage à 95 °C sépare les deux brins d’ADN.

• Lors de l’hybridation, les amorces se fixent sur les brins d’ADN à une température d’environ 50 °C, qui peut varier.

Compléments

• Lors de l’élongation, à 72 °C, la polymérase copie les brins d’ADN.

💡 Astuce mémo

Dénaturation, hybridation, puis élongation.

📖 5. Amplification et interprétation du test

★ À maîtriser

• La répétition des cycles produit des milliards de copies du fragment d’ADN ciblé, selon une amplification exponentielle.

📌 Un test PCR est positif lorsque l’échantillon montre une amplification du matériel génétique ciblé, et négatif lorsqu’aucune amplification n’est observée.

Compléments

• Le thermocycleur chauffe les échantillons à plusieurs températures au cours des cycles de PCR.

💡 Astuce mémo

Amplification détectée : positif ; aucune amplification : négatif.