Comment identifier une protéine d’intérêt après SDS-PAGE ?
Grâce à des anticorps spécifiques.
Comment transfère-t-on les protéines du gel à la membrane ?
Par application d’un courant électrique.
Par quelles interactions les protéines se fixent-elles à la membrane ?
Par des interactions hydrophobes et ioniques.
Pourquoi bloque-t-on la membrane avant l’incubation avec les anticorps ?
Pour limiter les interactions non spécifiques.
Quelle est la séquence d’incubation dans un Western blot ?
Anticorps primaire puis anticorps secondaire avec lavages entre.
Que produit l’ajout d’un substrat chimiluminescent sur un anticorps secondaire enzymatique ?
Un signal luminescent détectable.
Qu'est-ce qu'une protéine de fusion en génie génétique ?
Une protéine de fusion est produite en fusionnant la protéine d’intérêt avec une petite séquence appelée étiquette.
Qu'est-ce qu'un Tag dans le contexte des protéines de fusion ?
Un Tag est un petit épitope reconnu par des anticorps commerciaux.
Quelle est la taille typique des Tags FLAG, HIS, HA et Myc ?
Ils ont généralement une taille inférieure à 3 kDa.
Pourquoi la petite taille des Tags limite-t-elle leur impact ?
Parce qu'elle limite leur impact sur la structure et le poids moléculaire de la protéine d’intérêt.
Qu'est-ce que la GFP ?
La GFP est une protéine de méduse qui émet une fluorescence verte sous lumière spécifique.
Quel est le poids moléculaire approximatif de la GFP ?
La GFP pèse environ 27 kDa.
Quel effet la GFP a-t-elle sur la protéine de fusion ?
Elle augmente significativement le poids moléculaire de la protéine de fusion.
Qu'est-ce que l'immunoprécipitation ?
Une méthode pour isoler et purifier une protéine d’intérêt avec un anticorps spécifique.
Que fait l'anticorps spécifique dans un lysat cellulaire ?
Il est incubé avec la protéine d’intérêt pour la reconnaître.
Quel rôle joue la protéine A de Staphylococcus aureus dans l'immunoprécipitation ?
Elle se fixe à l’anticorps par affinité.
Que se passe-t-il après centrifugation dans l'immunoprécipitation ?
Le culot contenant le complexe immunoprécipité est conservé.
Que devient le surnageant après centrifugation ?
Il est éliminé.
Que fait-on au culot après sa conservation ?
Il est solubilisé puis déposé sur un gel SDS-PAGE.
Quelle technique suit le dépôt du culot sur gel SDS-PAGE ?
La réalisation d’un Western blot pour visualiser la protéine.
Qu'est-ce que la co-immunoprécipitation ?
Une extension de l’immunoprécipitation pour étudier les interactions protéine-protéine.
Que précipite l’immunoprécipitation d’une protéine d’intérêt ?
La protéine d’intérêt et ses protéines associées.
Comment étudier les protéines associées après immunoprécipitation ?
Par électrophorèse et Western blot.
Que signifie la visualisation de la protéine Y après immunoprécipitation de X ?
X et Y interagissent physiquement.
Quelle nature peut avoir l’interaction entre X et Y dans un lysat total ?
Elle peut être directe ou indirecte.
Que conclure d’une interaction observée entre deux protéines purifiées en contexte acellulaire ?
L’interaction est directe.
Pourquoi l’interaction entre deux protéines purifiées est-elle directe ?
Parce qu’aucune autre protéine intermédiaire n’est présente.
Quel est l'objectif principal des manipulations génétiques ?
Modifier l'expression d'un gène dans différents modèles vivants.
Quelle différence distingue une manipulation génétique in vitro d'une in vivo ?
In vitro se fait en boîte de culture, in vivo dans un organisme vivant.
Sur quels stades et parties peut-on réaliser une manipulation génétique in vivo ?
Sur un embryon ou un animal adulte, dans tout l’organisme, un tissu, une cellule ou un stade donné.
Qu'impose un knock-out total sur un gène ?
Il invalide le gène dans tout l’organisme.
Quelle est la spécificité d'un knock-out tissu-spécifique ou cellule-spécifique ?
Il restreint l'invalidation à un tissu entier ou certaines cellules d’un tissu.
Qu'est-ce qu'un knock-out conditionnel ?
Un knock-out qui invalide un gène dans des conditions précises à partir d’un stade donné.
Quelle stratégie est souvent utilisée pour activer un knock-out conditionnel ?
L'ajout de dexaméthasone dans l’eau de boisson.
Qu'est-ce qu'un siRNA ?
Un petit ARN interférent double brin non codant d'environ 20 nucléotides.
Que se passe-t-il après la transfection du siRNA par des vésicules lipidiques ?
Le siRNA est libéré dans le cytoplasme et s'associe au complexe RISC.
Que fait la fixation du siRNA au complexe RISC ?
Elle sépare les deux brins du siRNA.
Que devient le brin passager du siRNA après fixation à RISC ?
Il est éliminé.
Comment le brin guide du siRNA agit-il avec RISC ?
Il reconnaît l'ARNm cible par complémentarité.
Que fait le complexe RISC après reconnaissance de l'ARNm cible ?
Il clive l'ARNm dans le cytoplasme.
Quelle est la conséquence du clivage de l'ARNm par RISC ?
L'ARNm clivé est dégradé et n'est pas traduit en protéine.
Comment les siRNA sont-ils administrés in vivo pour protéger et faciliter leur entrée cellulaire ?
Ils sont injectés en polyplexes par voie intraveineuse, internalisés par endocytose puis libérés dans le cytoplasme.
Teste tes connaissances avec un QCM de 21 questions sur Techniques d’analyse et de manipulation génétique.
1. Après une séparation par SDS-PAGE, quelle méthode permet d’identifier spécifiquement une protéine d’intérêt ?
2. Quel est le rôle du courant électrique lors du Western blot ?
Révisez le cours complet dans la fiche de révision de Techniques d’analyse et de manipulation génétique.
Voir la fiche →Importe ton cours et l'IA génère des flashcards en 30 secondes.
Générateur de flashcards