Fiche de révision : Techniques de laboratoire

📋 Plan du Cours

1. Bonnes pratiques de laboratoire
2. Règles pratiques en laboratoire
3. Nettoyage désinfection stérilisation
4. Organisation du laboratoire
5. Matériel et confinement

📖 1. Bonnes pratiques de laboratoire

🔑 Notions clés & Définitions

• Bonnes pratiques de laboratoire : Ensemble de règles à respecter lors d’essais non cliniques, sur l’animal ou sur des modèles in vitro, afin de garantir la qualité et l’intégrité des données obtenues.

★ À maîtriser

• Les BPL ont été instituées dans les années 80 aux États-Unis après la découverte de fraudes dans des données de toxicologie fournies à la FDA par des entreprises pharmaceutiques.

Compléments

• En 1969, Monsanto a passé un contrat avec Industrial BioTest Labs pour réaliser des études de toxicité chronique, puis s’est arrangé avec ce laboratoire pour répéter certaines études afin d’obtenir de meilleures conclusions.

• En France, les BPL sont appliquées par 20 000 personnes dans l’industrie biotechnologique et 40 000 personnes dans les laboratoires de recherche et développement.

💡 Astuce mémo

Fraudes de toxicologie → BPL pour garantir l’intégrité des données

📖 2. Règles pratiques en laboratoire

★ À maîtriser

📌 En travaux pratiques, il faut porter une blouse propre, couvrante, fermée et non inflammable, attacher ses cheveux, avoir les ongles courts, ne pas porter de bijoux aux poignets et aux doigts et utiliser les équipements de protection individuelle adaptés.

📌 Il est interdit de boire, manger, fumer, mâcher du chewing-gum ou pipeter à la bouche dans le laboratoire.

• Le lavage des mains doit durer de 40 à 60 secondes.

📌 Il faut systématiquement étiqueter les échantillons, mesurer avec précision, nettoyer immédiatement les déversements, utiliser les hottes pour les produits chimiques volatils ou toxiques et manipuler portes et fenêtres fermées lorsqu’un produit contaminé produit un aérosol.

Compléments

📌 Les aiguilles ne doivent jamais être recapuchonnées, le matériel piquant ou coupant doit être limité ou remplacé, et les produits ou matériels contaminés doivent être éliminés, notamment par autoclave.

💡 Astuce mémo

Étiqueter, mesurer, décontaminer, protéger

📖 3. Nettoyage désinfection stérilisation

🔑 Notions clés & Définitions

• Désinfection : Action à visée antimicrobienne qui réduit temporairement la charge microbienne globale d’un environnement de 100000 à 1, soit une réduction de 99,999 %.
• Stérilisation : Procédé par lequel tous les germes, notamment les bactéries, virus, levures et champignons, sont définitivement détruits en surface et en profondeur dans un espace clos incontaminable.
• Détergent : Contient des agents mouillants ou tensioactifs, des enzymes et des parfums.

📝 Points essentiels

• 🔄 Le nettoyage de la paillasse suit les étapes suivantes:
  1. Appliquer du détergent sur la paillasse.
  2. Éliminer le détergent avec un papier absorbant et jeter ce papier dans les déchets souillés.
  3. Rincer la paillasse et l’essuyer avec un papier jetable.
  4. Appliquer le désinfectant et le laisser agir.
  5. Enlever le désinfectant, rincer la paillasse et jeter le papier avec les déchets contaminés.

💡 Astuce mémo

Nettoyer → désinfecter → stériliser

📖 4. Organisation du laboratoire

📝 Points essentiels

• L’organisation concerne notamment: la paillasse, le cahier de laboratoire, les expériences au fur et à mesure de la journée et de la semaine, les échantillons, les réactifs, les vacances

• La gestion d’un laboratoire comprend: les stocks de produits de consommation courante, les effectifs statutaires et stagiaires, les conflits, les finances et la recherche de financement

📖 5. Matériel et confinement

🔑 Notions clés & Définitions

• Poste de sécurité microbiologique : Équipement utilisé pour protéger le manipulateur, l’environnement et l’expérience lors du travail en laboratoire.

★ À maîtriser

📌 Les groupes de risque vont du groupe 1, à risque faible, au groupe 4, à risque majeur : le groupe 1 ne provoque pas de maladie chez l’individu sain, le groupe 2 peut provoquer une maladie sévère transmissible, le groupe 3 une maladie grave voire mortelle à transmission limitée, et le groupe 4 une maladie mortelle avec un risque collectif élevé et aucun traitement connu.

Compléments

• Escherichia coli et Bacillus subtilis sont des exemples d’agents du groupe de risque 1, tandis que Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus et Listeria monocytogenes appartiennent au groupe de risque 2.

• Le niveau de confinement L1 correspond à un local isolé avec porte et fenêtres fermées, murs et sols lisses facilement lavables, ainsi qu’un autoclave dans le bâtiment.

• Le niveau de confinement L2 ajoute notamment un accès réglementé, des lavabos à commandes non manuelles, des autoclaves dans le bâtiment, des PSM et des centrifugeuses sécurisées.

• Le niveau L3 ajoute au niveau L2 un sas, la filtration de l’air entrant et sortant, une pression négative avec alarme, un groupe électrogène et un PSM de type II avec autoclave à double entrée.

• Le niveau L4 ajoute au niveau L3 une ventilation secourue, un interphone obligatoire, un double sas et une douche obligatoire, avec un PSM de type III.

💡 Astuce mémo

Manipulateur, environnement, expérience : les trois éléments à protéger

📊 Tableaux de synthèse

Nettoyage, désinfection et stérilisation

Groupes de risque et confinement