Fiche de révision : Observations microscopiques des bactéries

📋 Plan du Cours

1. Préparation du frottis bactérien
2. Coloration de Gram
3. Réglages et lecture microscopique
4. Différences de paroi bactérienne
5. Préparation de l’état frais
6. Observation de la mobilité
7. Mobilité par les flagelles
8. Mobilités sur surfaces

📖 1. Préparation du frottis bactérien

★ À maîtriser

• 🔄 La réalisation du frottis comprend les étapes suivantes:
  1. Étalement des bactéries
  2. Séchage à l’air ou sur plaque chauffante pendant 2 minutes maximum
  3. Fixation par trois passages contre la flamme éclairante
  4. Rinçage
  5. Nouveau séchage

Compléments

• Le frottis est préparé à partir d’une goutte de bouillon de culture ou d’une goutte d’eau stérile contenant une colonie bactérienne.

💡 Astuce mémo

Étaler, sécher, fixer, rincer, sécher

📖 2. Coloration de Gram

★ À maîtriser

• La coloration de Gram comprend l’application successive de réactifs, dont l’acétone dissout la membrane externe des bactéries Gram négatif et fait disparaître leur coloration bleu-violet.

• En 1884, Christian Gram met au point une méthode empirique de coloration bactérienne.

📌 Les bactéries Gram positif restent colorées en bleu violet, tandis que les bactéries Gram négatif, décolorées par l’acétone, sont recolorées en rose par la fuchsine.

Compléments

• Le cytoplasme bactérien est coloré en violet au cours de la coloration de Gram.

💡 Astuce mémo

Acétone sur la paroi → Gram négatif décoloré

📖 3. Réglages et lecture microscopique

★ À maîtriser

📌 Pour observer une coloration de Gram, le microscope utilise un objectif ×100 avec une goutte d’huile à immersion, un condenseur levé et un diaphragme ouvert.

• La coloration de Gram permet d’observer la morphologie bactérienne, le mode de groupement et le caractère Gram positif ou Gram négatif.

Compléments

• Les morphologies et groupements cités sont:
  • Bacille
  • Cocobacille
  • Coque
  • Isolé
  • Par deux
  • En amas
  • En tétrade

📖 4. Différences de paroi bactérienne

🔑 Notions clés & Définitions

• Peptidoglycane : Constitué de chaînes alternant l’acide muramique (NAM) et la N-acétyl-D-glucosamine (NAG), reliés par une liaison β-1,4.
• Lipopolysaccharide : Comprend un lipide A ancré dans la membrane externe, des noyaux polysaccharidiques et un antigène O dont la composition varie selon les souches.

★ À maîtriser

📌 Chez les bactéries Gram positif, le pont pentaglycine relie les tétrapeptides et tous les peptides sont pontés, ce qui forme un réseau de peptidoglycane serré.

📌 Chez les bactéries Gram négatif, une liaison directe relie les tétrapeptides de deux chaînes adjacentes, mais les tétrapeptides ne sont pas tous reliés, ce qui forme une structure plus lâche.

Compléments

• Le lipide A du LPS est une endotoxine libérée lors de la lyse de la paroi.

• Les acides téchoïques sont des polymères de sorbitol ou de phosphoglycérol fixés sur la NAG du peptidoglycane et permettant au peptidoglycane de s’attacher à la membrane.

💡 Astuce mémo

Gram positif : réseau serré ; Gram négatif : réseau lâche et membrane externe

📖 5. Préparation de l’état frais

🔑 Notions clés & Définitions

• État frais : Observation de bactéries nageant en milieu liquide.

📝 Points essentiels

• Pour préparer un état frais, il faut agiter le tube avant le prélèvement puis déposer une goutte de 20 μL sur la lame.

📖 6. Observation de la mobilité

📝 Points essentiels

• Pour observer un état frais, il faut utiliser un objectif ×40, un condenseur baissé et un diaphragme fermé, sans rien déposer sur la lamelle.

• Une bactérie est considérée comme mobile lorsqu’elle réalise des trajets très différents dans toutes les directions.

• Les mouvements browniens correspondent à une agitation moléculaire et le mouvement liquidien entraîne toutes les bactéries dans le même sens et à la même vitesse ; aucun des deux ne traduit une mobilité bactérienne.

💡 Astuce mémo

Mobilité réelle : trajets différents ; agitation : déplacement collectif ou aléatoire

📖 7. Mobilité par les flagelles

🔑 Notions clés & Définitions

• Ciliature : Désigne la position des flagelles chez une bactérie.

★ À maîtriser

• 🔄 Le flagelle comprend successivement:
  1. Un filament hélicoïdal de flagelline
  2. Un crochet souple
  3. Un corpuscule basal entraînant le flagelle par rotation

• Le déplacement par flagelles alterne des phases de nage et de culbute.

• Les flagelles sont invisibles en microscopie photonique sauf après une coloration à l’argent.

• Chez les bactéries Gram négatif, l’énergie de rotation du flagelle est fournie par le flux de protons traversant les protéines Mot, et les protéines Fli constituent le moteur de rotation.

Compléments

• Chez les bactéries Gram positif, le filament flagellaire peut atteindre 10 μm de longueur et possède un diamètre de 20 nm ; le crochet mesure 60 nm de long.

💡 Astuce mémo

Filament, crochet, corpuscule basal : propulsion et rotation

📖 8. Mobilités sur surfaces

★ À maîtriser

• 🔄 Le twitching comprend:
  1. Extension du pilus
  2. Adhésion du pilus au support
  3. Rétraction du pilus

• Le gliding est un glissement produit par un jet de slime à travers des pores, qui peut propulser la bactérie à 10 μm/s chez les myxobactéries.

Compléments

• Les bactéries citées sont:
  • Escherichia
  • Bacillus
  • Pseudomonas
  • Salmonella
  • Streptococcus
  • Legionella
  • Vibrio
  • Myxococcus

💡 Astuce mémo

Pili : extension, adhésion, rétraction ; slime : propulsion

📊 Tableaux de synthèse

Comparaison des bactéries Gram positif et Gram négatif