Fiche de révision : Méthodes d’analyses tissulaires

📋 Plan du Cours

1. Fondements et histoire de l’histologie
2. Échelles d’observation du vivant
3. Principes de la microscopie
4. Microscopies optique et électronique
5. Signaux et modes électroniques
6. Préparation des tissus en microscopie optique
7. Préparation des tissus en microscopie électronique
8. Colorations histologiques
9. Marquages moléculaires et applications

📖 1. Fondements et histoire de l’histologie

🔑 Notions clés & Définitions

• Histologie : Discipline qui étudie et décrit les tissus et l’ultrastructure cellulaire à partir de préparations observées et marquées.

📝 Points essentiels

• La cellule est l’unité fondamentale du vivant, les cellules forment des tissus, les tissus forment des organes et les organes forment des systèmes ou appareils.

💡 Astuce mémo

Cellule → tissu → organe → appareil

📖 2. Échelles d’observation du vivant

📝 Points essentiels

• La résolution de l’œil humain est d’environ 200 μm, celle du microscope optique atteint environ 200 nm et celle de la microscopie électronique peut atteindre environ 0,2 nm.

• Avec un microscope optique, on peut observer un lobule hépatique, des travées hépatocytaires et des hépatocytes, tandis qu’un microscope électronique permet d’observer les mitochondries et l’échelle nucléosomale.

💡 Astuce mémo

Œil pour l’organe, microscope optique pour le tissu, microscope électronique pour l’ultrastructure

📖 3. Principes de la microscopie

🔑 Notions clés & Définitions

• Résolution : Distance minimale séparant deux points qui peuvent être individualisés.

📝 Points essentiels

📐 Formule — La résolution vérifie $d = \frac{0{,}61\lambda}{n\sin\alpha}$, où λ est la longueur d’onde, n l’indice de réfraction et α le demi-angle des rayons entrant dans l’objectif.

💡 Astuce mémo

λ diminue ou α augmente → d diminue → résolution augmente

📖 4. Microscopies optique et électronique

📝 Points essentiels

• Dans un microscope, le rayonnement traverse successivement la source, le condenseur, l’échantillon, l’objectif et le projecteur, qui forme l’image finale agrandie.

📌 La microscopie optique utilise des photons et des lentilles en verre, tandis que la microscopie électronique utilise des électrons et des lentilles électromagnétiques.

📌 En microscopie optique, l’échantillon peut être non déshydraté et l’observation est non destructive, tandis qu’en microscopie électronique l’échantillon doit être déshydraté et le faisceau électronique est destructeur.

💡 Astuce mémo

Photon et lentilles en verre pour la MO ; électron et lentilles électromagnétiques pour la ME

📖 5. Signaux et modes électroniques

📝 Points essentiels

📌 La diffusion inélastique concerne généralement des atomes de faible numéro atomique et produit une zone claire, tandis que la diffusion élastique concerne des atomes de numéro atomique élevé et produit une zone sombre.

📌 En MET, les électrons traversent l’échantillon et forment une image en deux dimensions avec une résolution supérieure à celle du MEB, tandis qu’en MEB les électrons se réfléchissent sur la surface et permettent une visualisation en trois dimensions.

💡 Astuce mémo

MET traverse et montre en 2D ; MEB balaie la surface et montre en 3D

📖 6. Préparation des tissus en microscopie optique

🔑 Notions clés & Définitions

• Fixation : Étape qui empêche la dégradation intrinsèque par cytolyse et nécrose ainsi que la dégradation extrinsèque par contamination microbienne, tout en durcissant le prélèvement.

📝 Points essentiels

• La préparation d’un échantillon pour la microscopie optique suit une succession d’étapes allant du prélèvement et de la fixation jusqu’à l’obtention d’une lame blanche.

• 🔄 L’inclusion en paraffine comprend: la déshydratation par éthanol de 60 % à 100 %, la clarification au xylène, l’imprégnation par la paraffine chaude, la mise en bloc de paraffine et son refroidissement

• Le microtome réalise des coupes de paraffine de 3 à 5 μm d’épaisseur, qui sont étalées sur un bain d’eau puis récupérées sur une lame blanche.

💡 Astuce mémo

Fixer → déshydrater → clarifier → imprégner → inclure → couper

📖 7. Préparation des tissus en microscopie électronique

📝 Points essentiels

• Pour la microscopie électronique, l’échantillon est fixé au glycéraldéhyde et au tétraoxyde d’osmium, imprégné dans une résine dure et coupé à l’ultramicrotome en sections d’environ 80 nm.

📖 8. Colorations histologiques

📝 Points essentiels

📌 Dans la coloration HE, l’hématoxyline basique colore en bleu-violet les compartiments acides basophiles, tandis que l’éosine acide colore en rouge rosé les compartiments basiques éosinophiles ou acidophiles.

• La coloration HES associe l’hématoxyline et l’éosine au safran jaune-orangé, qui fixe principalement les tissus conjonctifs.

💡 Astuce mémo

Hématoxyline basophile bleue ; éosine acidophile rouge rosée

📖 9. Marquages moléculaires et applications

🔑 Notions clés & Définitions

• Immunohistologie : Marquage spécifique de protéines par des anticorps dirigés contre ces protéines et comprenant l’immunohistochimie et l’immunofluorescence.
• Hybridation in situ : Utilisation de sondes nucléotidiques complémentaires pour détecter dans un tissu une séquence spécifique d’ADN ou d’ARN.

📝 Points essentiels

📌 Dans un marquage direct, l’anticorps primaire porte la molécule reportrice, tandis que dans un marquage indirect l’anticorps secondaire reconnaît l’anticorps primaire et peut amplifier le signal.

• En immunohistochimie indirecte, l’anticorps secondaire porte une enzyme comme la HRP ou la phosphatase alcaline, qui transforme la DAB soluble en précipité insoluble au site de la protéine ciblée.

• En immunofluorescence, un fluorochrome absorbe une lumière d’excitation à une longueur d’onde donnée puis émet des photons à une longueur d’onde supérieure, comme Alexa 488 excité à 488 nm et émettant à 535 nm.

💡 Astuce mémo

Anticorps pour les protéines ; sondes complémentaires pour les acides nucléiques

📊 Tableaux de synthèse

Comparaison des microscopies

MET et MEB