Qu'impose la PCR pour amplifier une région d'ADN ?
Deux amorces complémentaires de brins opposés et orientées l'une vers l'autre.
Pourquoi évaluer l'orientation des amorces A, B et C en PCR ?
Parce qu'une hybridation seule ne suffit pas à produire une amplification PCR.
Quelle taille fait le produit PCR du marqueur CAPS et quels fragments TaqI produit-il ?
Le produit PCR fait 500 pb et TaqI produit des fragments de 200 pb et 300 pb.
Quelle est la conséquence d'une digestion TaqI avant PCR sur le produit attendu ?
La digestion TaqI avant PCR empêche d'obtenir le produit attendu si la séquence d'hybridation est dégradée.
PCR
Amplifie une région d’ADN entre deux amorces.
Analyse CAPS
PCR, digestion TaqI, observation sur gel.
Fragments TaqI
200 pb et 300 pb à partir d’un produit 500 pb.
Hybridation amorces
Plus de la moitié de la séquence, orientation cruciale.
Amplification LBO-s
Trois cycles: hybridation, élongation, génération.
Sites de restriction
Séquences ajoutées en 5′ pour clonage.
Clonage dans pBR322
Insertion d’un fragment d’ADN dans ce plasmide.
Teste tes connaissances avec un QCM de 8 questions sur PCR, marqueurs CAPS et clonage.
1. Dans quelle configuration deux amorces permettent-elles l’amplification d’une région d’ADN par PCR ?
2. Quand une hybridation d’amorce doit-elle être représentée dans l’analyse d’une PCR ?
Révisez le cours complet dans la fiche de révision de PCR, marqueurs CAPS et clonage.
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