PCR, marqueurs CAPS et clonage

📋 Plan du Cours

1. Hybridation des amorces PCR
2. Analyse du marqueur CAPS
3. Amplification du fragment LBO-s
4. Clonage dans pBR322

📖 1. Hybridation des amorces PCR

🔑 Notions clés & Définitions

• PCR : Amplifie une région d’ADN située entre deux amorces complémentaires de brins opposés et orientées l’une vers l’autre.

★ À maîtriser

📌 Une hybridation d’amorce n’est représentée que si elle implique plus de la moitié de la séquence de l’amorce, en faisant apparaître les éventuels mésappariements.

📌 Les amorces A, B et C doivent être évaluées selon leur complémentarité avec la séquence matrice et selon leur orientation, car une hybridation seule ne suffit pas à produire une amplification PCR.

Compléments

• La séquence fournie comporte deux régions séparées par une coupure représentée par « // », avec notamment les motifs 5′-ATCTCAACGGATCCCTTGATATCCCGTTTT-3′ et 5′-CAGCATGCATTCCGATATCCCTGCAATTTC-3′.

💡 Astuce mémo

Une amorce doit s’hybrider sur un brin, tandis que deux amorces correctement orientées encadrent la région amplifiée.

📖 2. Analyse du marqueur CAPS

• Pour analyser un marqueur CAPS, on amplifie d’abord l’ADN par PCR avec les amorces choisies, puis on digère le produit obtenu par l’enzyme de restriction TaqI avant d’observer les fragments sur un gel.