Fiche de révision : Techniques de laboratoire

📋 Plan du Cours

1. Bonnes pratiques de laboratoire
2. Hygiène et sécurité en TP
3. Nettoyage désinfection stérilisation
4. Organisation du laboratoire
5. Matériel et confinement
6. Groupes de risque et niveaux

📖 1. Bonnes pratiques de laboratoire

🔑 Notions clés & Définitions

• Bonnes pratiques de laboratoire : Un ensemble de règles à respecter lors d’essais non cliniques, sur l’animal ou sur des modèles in vitro, afin de garantir la qualité et l’intégrité des données obtenues.

★ À maîtriser

• Les BPL ont été instituées aux États-Unis dans les années 80 après la découverte de fraudes de laboratoires de toxicologie dans des données fournies à la FDA par des entreprises pharmaceutiques.

Compléments

• En 1969, Monsanto a passé un contrat avec Industrial BioTest Labs pour réaliser des études de toxicité chronique, puis s’est arrangé avec le laboratoire pour répéter certaines études afin d’obtenir de meilleures conclusions.

• En France, 20 000 personnes appliquent les BPL dans l’industrie biotechnologique et 40 000 dans les laboratoires de recherche et de développement.

💡 Astuce mémo

Règles respectées → données fiables et intègres

📖 2. Hygiène et sécurité en TP

★ À maîtriser

📌 En TP, il faut porter une blouse non inflammable, propre, couvrante, fermée et réservée au laboratoire, attacher ses cheveux, avoir les ongles courts, ne pas porter de bijoux aux mains et poignets, se laver régulièrement les mains et utiliser des protections individuelles en connaissant leurs limites.

📌 En TP, il est interdit de boire, manger, fumer, mâcher du chewing-gum et pipeter à la bouche.

• Le lavage des mains doit durer de 40 à 60 secondes.

📌 Il faut tout étiqueter, mesurer avec précision, nettoyer immédiatement selon le protocole de décontamination approprié et utiliser les hottes avec les produits chimiques volatils ou toxiques.

Compléments

📌 Les aiguilles ne doivent jamais être recapuchonnées, les objets piquants ou coupants doivent être limités et les matériels contaminés doivent être éliminés, notamment par autoclave.

💡 Astuce mémo

Étiqueter → mesurer → décontaminer

📖 3. Nettoyage désinfection stérilisation

🔑 Notions clés & Définitions

• Nettoyage : Vise à éliminer les salissures, notamment les matières organiques, à prévenir la formation d’un biofilm et à réduire la charge microbienne initiale.
• Désinfection : Toute action à visée antimicrobienne qui réduit temporairement la charge microbienne globale d’un environnement de 100 000 à 1, soit une réduction de 99,999 %.
• Stérilisation : Procédé qui détruit définitivement tous les germes, notamment les bactéries, virus et levures, en surface et en profondeur dans un espace clos incontaminable.

★ À maîtriser

• 🔄 Le nettoyage de la paillasse suit ces étapes:
  1. Appliquer le détergent
  2. Éliminer le détergent avec un papier absorbant et jeter ce papier dans les déchets souillés
  3. Rincer et essuyer la paillasse
  4. Appliquer le désinfectant et le laisser agir
  5. Enlever le désinfectant, rincer et jeter le papier avec les déchets contaminés

Compléments

• Les détergents contiennent:
  • des agents mouillants ou tensioactifs
  • des enzymes
  • des parfums

💡 Astuce mémo

Nettoyage enlève, désinfection réduit, stérilisation détruit

📖 4. Organisation du laboratoire

📝 Points essentiels

• L’organisation concerne: la paillasse, le cahier de laboratoire, les expériences au fur et à mesure de la journée et de la semaine, les échantillons, les réactifs, les congés

• La gestion du laboratoire comprend: les stocks de produits de consommation courante, les effectifs, les conflits, les finances liées à la recherche de financement

📖 5. Matériel et confinement

🔑 Notions clés & Définitions

• Écoulement laminaire : Un flux d’air unidirectionnel, de vélocité uniforme et non turbulent.

★ À maîtriser

• Les trois éléments à protéger sont:
  • le manipulateur
  • l’environnement
  • l’expérience

Compléments

• Les techniques utilisées pour travailler aseptiquement à proximité d’un bec Bunsen et dans un poste de sécurité microbiologique sont similaires.

💡 Astuce mémo

Protéger manipulateur, environnement et expérience

📖 6. Groupes de risque et niveaux

★ À maîtriser

📌 Le groupe de risque 1 correspond à un risque faible, le groupe 2 à un risque modéré, le groupe 3 à un risque fort et le groupe 4 à un risque majeur.

• Les exemples associés aux niveaux de confinement sont:
  • L1 : Escherichia coli et Bacillus subtilis
  • L2 : Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes et virus de la vaccine
  • L3 : VIH, virus de l’hépatite B, virus de la rage, Mycobacterium tuberculosis et prion
  • L4 : virus de la variole, virus de la fièvre de Lhassa et virus Ebola

Compléments

• Le confinement L1 exige un local isolé par une porte et des fenêtres fermées, avec des murs et sols lisses et facilement lavables, ainsi qu’un autoclave dans le bâtiment.

• Le confinement L2 ajoute un accès réglementé, des lavabos à commandes non manuelles, des autoclaves dans le bâtiment, des postes de sécurité microbiologique et une centrifugeuse sécurisée.

• Le confinement L3 ajoute à L2 un sas, la filtration de l’air entrant et sortant, une pression négative avec alarme, un groupe électrogène, et utilise un PSM de type II et un autoclave à double entrée.

• Le confinement L4 ajoute à L3 une ventilation secourue, un interphone obligatoire, un double sas et une douche obligatoire, avec un PSM de type III.

💡 Astuce mémo

Risque 1 à 4 : faible → majeur

📊 Tableaux de synthèse

Nettoyage, désinfection et stérilisation