Fiche de révision : Dosages radio-immunologiques

📋 Plan du Cours

1. Principe du dosage radio-immunologique
2. Antigènes, anticorps et haptènes
3. Caractéristiques de la réaction Ag-Ac
4. Isotopes et détection radioactive
5. Dosage par compétition RIA
6. Dosage sandwich IRMA
7. Étalonnage et comparaison des méthodes
8. Atouts et limites du RIA

📖 1. Principe du dosage radio-immunologique

🔑 Notions clés & Définitions

• Dosage radio-immunologique : Méthode d’analyse quantitative fondée sur la réaction antigène-anticorps associée à un radio-isotope, caractérisée par une grande sensibilité et une grande spécificité.

📖 2. Antigènes, anticorps et haptènes

🔑 Notions clés & Définitions

• Antigène : Élément qui, introduit dans l’organisme, provoque une réaction immunitaire avec production d’anticorps ; son site de reconnaissance est l’épitope.

• Anticorps : Élément plasmatique, ou immunoglobuline, de nature protéique qui réagit spécifiquement avec un antigène ; son site de reconnaissance est le paratope.
• Haptène : Élément de faible poids moléculaire incapable de provoquer seul une réaction antigène-anticorps, mais qui devient actif lorsqu’il est couplé à une protéine porteuse dite « carrière ».

📝 Points essentiels

📌 Les anticorps polyclonaux reconnaissent différents épitopes, tandis que les anticorps monoclonaux reconnaissent spécifiquement un seul type d’épitope.

💡 Astuce mémo

L’antigène porte l’épitope ; l’anticorps porte le paratope.

📖 3. Caractéristiques de la réaction Ag-Ac

🔑 Notions clés & Définitions

• Affinité : Tendance avec laquelle un épitope réagit avec un anticorps, exprimable quantitativement par la constante d’affinité à l’équilibre.

• Spécificité : Aptitude d’un anticorps à ne réagir qu’avec l’antigène correspondant ; le paratope reconnaît un seul épitope.

★ À maîtriser

• La réaction antigène-anticorps est réversible et forme un complexe entre un épitope de l’antigène et le paratope d’un anticorps spécifique.

Compléments

• Les faibles forces de liaison rendent compte de la réversibilité de la réaction antigène-anticorps.

• Un temps d’incubation est nécessaire pour obtenir une liaison antigène-anticorps maximale.

📖 4. Isotopes et détection radioactive

★ À maîtriser

• L’isotope 125 I est le plus utilisé en RIA ; c’est un émetteur gamma par capture électronique, d’énergie 35 KeV et de période 60 jours.

• Le marqueur fournit un signal facilement analysable, proportionnel à l’antigène à doser, et son marquage doit préserver les propriétés physicochimiques et immunologiques des réactifs ainsi que les caractéristiques de la réaction antigène-anticorps.

Compléments

• Le tritium 3 H est un émetteur bêta d’énergie 19 KeV et de période 12,3 ans.

• Le cobalt 57 Co est un émetteur gamma par capture électronique, d’énergie 122 KeV et de période 271 jours.

• Le compteur gamma associe un scintillateur solide à un photomultiplicateur.

• 🔄 La chaîne de détection comprend :

  1. cristal puits
  2. photomultiplicateur
  3. compteur
  4. sélecteur
  5. moniteur

📖 5. Dosage par compétition RIA

★ À maîtriser

• En dosage par compétition, une quantité définie d’antigène marqué et l’antigène à doser se disputent un nombre défini de sites de fixation sur des anticorps en quantité insuffisante par rapport aux antigènes.

• En RIA par compétition, le signal radioactif est inversement proportionnel à la concentration de l’antigène à doser.

Compléments

• En compétition, l’augmentation de la concentration en antigène non marqué augmente la concentration des complexes antigène-anticorps non marqués.

• La méthode par compétition s’applique aux antigènes quelle que soit leur taille et convient aux antigènes possédant un seul épitope.

📌 Le dosage par compétition nécessite une forte affinité de l’anticorps pour l’antigène et un nombre constant de sites anticorps dans chaque tube pour assurer une bonne précision.

💡 Astuce mémo

Plus d’antigène non marqué → moins de radioactivité mesurée.

📖 6. Dosage sandwich IRMA

★ À maîtriser

• 🔄 Le dosage sandwich se déroule ainsi :

  1. L’anticorps liant est fixé sur un support solide.
  2. L’antigène à doser est capturé par l’anticorps liant.
  3. Le second anticorps marqué à l’iode 125 se fixe sur un autre épitope suffisamment éloigné.

• L’IRMA utilise des anticorps en excès et un second anticorps marqué, généralement des anticorps monoclonaux dirigés contre deux épitopes distincts.

• En IRMA, la radioactivité liée est directement proportionnelle à la quantité d’antigène.

Compléments

• L’IRMA améliore la reconnaissance spécifique grâce à deux anticorps dirigés contre deux épitopes différents et suffisamment éloignés.

📌 L’IRMA nécessite que l’antigène possède deux épitopes et peut présenter un effet crochet, aussi appelé effet cloche.

💡 Astuce mémo

Visualiser l’antigène pris en sandwich entre deux anticorps.

📖 7. Étalonnage et comparaison des méthodes

🔑 Notions clés & Définitions

• Courbe d’étalonnage : Courbe construite à partir des réponses obtenues avec des solutions étalons afin de déterminer la concentration de la substance dans des échantillons biologiques.

★ À maîtriser

📌 Le RIA par compétition utilise un défaut d’anticorps et un excès d’antigène, tandis que l’IRMA utilise un excès d’anticorps et un défaut d’antigène.

Compléments

• Le dosage radio-immunologique est une méthode relative qui compare les réponses des échantillons à doser à celles des solutions étalons.

📌 Le tableau comparatif associe le RIA par compétition aux anticorps polyclonaux et l’IRMA aux anticorps monoclonaux.

📌 Le RIA par compétition permet le dosage des haptènes, tandis que l’IRMA ne permet pas le dosage des haptènes.

💡 Astuce mémo

RIA : signal inverse ; IRMA : signal direct.

📖 8. Atouts et limites du RIA

★ À maîtriser

• Le RIA est une méthode de référence pour le dosage de très faibles concentrations d’analytes et conserve sa place malgré le développement de méthodes plus rapides mais très onéreuses.

Compléments

• Le marquage isotopique est facile, et le signal est direct, spontané et émis par le marqueur sans source d’énergie extérieure.

• Les limites pratiques du RIA comprennent : la réglementation, les précautions et la surveillance lors des manipulations, l’attente d’au moins une minute pour mesurer le signal isotopique, la durée de validité des réactifs

📊 Tableaux de synthèse

Comparaison entre RIA et IRMA