De 390 à 760 nm
Explication
La lumière visible s’étend approximativement de 390 à 760 nm et peut donc être utilisée par les microscopes photoniques. Les longueurs d’onde inférieures à 390 nm correspondent aux ultraviolets, tandis que celles supérieures à 760 nm relèvent de l’infrarouge.
La transmission donne une observation directe, tandis que la confocale reconstruit une image tridimensionnelle.
Explication
La microscopie par transmission permet une observation directe de structures pouvant mesurer environ 0,2 μm, alors que la microscopie confocale combine un balayage laser et un traitement informatique pour reconstruire une image en trois dimensions. L’utilisation d’un laser et la reconstruction 3D caractérisent donc la méthode confocale.
Le grossissement permettant à l’œil de distinguer les détails les plus fins.
Explication
Le grossissement utile correspond à celui qui permet à l’œil de distinguer clairement les détails les plus fins. Un grossissement supérieur ne garantit pas nécessairement une perception supplémentaire de détails.
La zone comprise entre le premier et le dernier plan net de l’image.
Explication
La profondeur de champ désigne l’étendue des plans qui apparaissent nets, du premier au dernier plan net de l’image. La séparation minimale de deux points correspond à la résolution et non à la profondeur de champ.
Elle diminue, passant d’environ 25 μm à 0,6 μm.
Explication
Une augmentation du grossissement réduit la profondeur de champ : elle vaut environ 25 μm à un grossissement de 25 et environ 0,6 μm à un grossissement de 1000. L’idée qu’elle augmente avec le grossissement inverse cette relation.
La plus petite distance entre deux objets encore distinguables.
Explication
La limite de résolution est la plus petite distance séparant deux objets que l’on peut encore distinguer dans les meilleures conditions. La profondeur des plans nets relève de la profondeur de champ, qui décrit une autre propriété de l’image.
Elle atteint environ 2 μm de résolution et un grossissement utile proche de x200.
Explication
La loupe binoculaire possède une limite de résolution voisine de 2 μm et un grossissement utile d’environ x200, pour l’observation d’objets opaques ou transparents. Les valeurs de 0,2 μm et x1250 correspondent plutôt aux performances possibles d’un microscope photonique classique.
La lumière traverse l’échantillon, le condenseur la concentre, l’objectif agrandit et renverse l’image, puis l’oculaire l’agrandit.
Explication
Dans ce microscope, la lumière traverse d’abord l’échantillon et le condenseur la concentre. L’objectif forme ensuite une image agrandie et renversée, tandis que l’oculaire réalise le second agrandissement et conduit à une image virtuelle.
$$400$$ fois
Explication
Le grossissement total se calcule en multipliant celui de l’objectif par celui de l’oculaire : . Additionner les deux grossissements donnerait , ce qui ne correspond pas à la règle de fonctionnement du microscope.
Il observe par transparence des échantillons de moins de 10 μm, avec une résolution pouvant atteindre 0,2 μm.
Explication
Le microscope photonique classique fonctionne par transparence sur des échantillons de moins de 10 μm et peut atteindre une limite de résolution de 0,2 μm, avec un grossissement utile de x40 à x1250. L’observation en lumière réfléchie décrit plutôt la loupe binoculaire, tandis que le balayage laser caractérise le microscope confocal.
Un anneau clair dans le condenseur associé à un anneau sombre dans l’objectif
Explication
Le contraste de phase utilise un anneau clair dans le condenseur et un anneau sombre dans l’objectif pour sélectionner la lumière déviée. Cette méthode permet notamment d’observer des cellules vivantes sans coloration, contrairement aux préparations histologiques courantes.
Il recombine une lumière polarisée dédoublée et produit une impression de relief sans halo lumineux
Explication
Le contraste interférentiel dédouble puis recombine une lumière polarisée, ce qui améliore la résolution et évite le halo lumineux, tout en créant une fausse impression de relief. Le contraste de phase repose plutôt sur des anneaux dans le condenseur et l’objectif.
La lumière diffusée par l’objet, comme celle produite par des bactéries apparaissant en points brillants
Explication
Le condenseur opaque au centre bloque la lumière directe et laisse observer la lumière diffusée par l’objet, notamment les bactéries sous forme de points brillants. La microscopie classique recueille plutôt la lumière transmise.
La lumière est totalement éteinte
Explication
Des lames polarisantes perpendiculaires entraînent une extinction totale de la lumière, tandis que des lames parallèles permettent sa transmission totale. Cette propriété dépend de l’orientation relative des lames.
Étalement, fixation, puis coloration
Explication
Les cellules destinées au microscope photonique suivent la séquence étalement, fixation et coloration. La séquence fixation, inclusion, coupe et coloration concerne les tissus, ce qui constitue la confusion la plus courante.
Elle préserve les structures, durcit la pièce et interrompt les réactions biologiques
Explication
La fixation préserve les structures au plus proche de leur état vivant, durcit la pièce et arrête les réactions biologiques, ce qui entraîne la mort cellulaire. Une préparation non fixée ne conserve donc pas cette stabilité structurale.
Les coagulants précipitent les protéines, tandis que les additifs établissent des pontages chimiques entre elles
Explication
Les fixateurs coagulants, comme le méthanol ou l’éthanol, coagulent les protéines, alors que les fixateurs additifs, comme les aldéhydes, créent des pontages chimiques. Les deux catégories se distinguent donc par leur mécanisme d’action sur les protéines.
Laver, déshydrater par alcools croissants, clarifier, remplacer le solvant par la paraffine, puis refroidir
Explication
L’inclusion en paraffine comprend le lavage, la déshydratation par alcools croissants, la clarification par un solvant organique, puis le remplacement de ce solvant par de la paraffine liquide avant le refroidissement. Les alcools décroissants et la coloration interviennent à une étape ultérieure de préparation de la lame.
Elle utilise une paraffine liquide chauffée à 56 °C et dure environ 36 à 48 heures
Explication
L’inclusion en paraffine emploie une paraffine liquide chauffée à 56 °C et demande entre 36 et 48 heures. La congélation est la technique rapide réalisée autour de -20 °C, ce qui explique la confusion fréquente.
La paraffine donne de bonnes images mais est lente, tandis que la congélation permet l’examen extemporané avec une qualité moindre
Explication
La technique en paraffine conserve bien les structures et fournit de bonnes images, mais elle est lente et altère notamment les petites molécules et la plupart des lipides. La congélation est adaptée à l’examen extemporané et maintient l’activité biochimique, mais ses images sont moins bonnes et sa conservation prolongée est limitée.
Les colorations vitales préservent les cellules vivantes, tandis que l’éosine-nigrosine révèle les cellules mortes perméables.
Explication
Les colorations vitales utilisent des colorants peu ou pas toxiques sur des cellules vivantes, alors que l’éosine-nigrosine pénètre dans les cellules mortes devenues perméables. L’idée selon laquelle l’éosine-nigrosine préserverait les cellules vivantes inverse donc les propriétés des deux méthodes.
Un colorant acide, anionique, se fixe aux molécules basiques et colore les structures acidophiles.
Explication
Les colorants acides sont anioniques et se lient aux molécules basiques, ce qui colore les structures acidophiles. Les colorants basiques suivent la relation inverse : ils sont cationiques et reconnaissent des molécules acides.
Elle met en évidence l’ADN, avec une intensité liée à la quantité présente.
Explication
La réaction de Feulgen-Rosenbeck met spécifiquement en évidence l’ADN et son intensité augmente avec la quantité d’ADN. La détection des sucres complexes relève plutôt de la technique PAS, tandis que les deux autres propositions décrivent d’autres approches.
Elle met en évidence les sucres complexes grâce à la fuchsine, tandis que les glucides simples sont éliminés.
Explication
La technique PAS utilise la fuchsine pour révéler les sucres complexes, alors que les monosaccharides et les glucides simples sont éliminés. La révélation de l’ADN correspond à Feulgen-Rosenbeck et la transformation d’un substrat décrit l’histo-enzymologie.
Elle localise des protéines cellulaires grâce à des anticorps qui reconnaissent leurs antigènes correspondants.
Explication
L’immuno-histochimie repose sur la liaison spécifique entre des anticorps et les antigènes protéiques correspondants. La détection de séquences d’acides nucléiques par des sondes relève de l’hybridation in situ.
Les polyclonaux reconnaissent plusieurs épitopes et les monoclonaux reconnaissent un seul épitope.
Explication
Les anticorps polyclonaux forment une population hétérogène capable de reconnaître plusieurs épitopes d’un antigène, tandis que les monoclonaux sont homogènes et dirigés contre un seul épitope. Leur distinction porte donc sur la diversité des anticorps et des sites reconnus.
Un anticorps spécifique couplé à un fluorochrome se fixe directement à l’antigène.
Explication
En immunofluorescence directe, le fluorochrome est porté par l’anticorps spécifique qui se lie directement à l’antigène, puis le signal est observé en épifluorescence. La succession anticorps primaire non marqué puis secondaire fluorescent caractérise l’immunofluorescence indirecte.
Un anticorps primaire non marqué se fixe à l’antigène, puis un anticorps secondaire fluorescent se fixe au primaire.
Explication
L’immunofluorescence indirecte utilise d’abord un anticorps primaire non marqué dirigé contre l’antigène, puis un anticorps secondaire fluorescent dirigé contre les immunoglobulines du primaire. La fixation directe d’un anticorps fluorescent à l’antigène correspond à l’immunofluorescence directe.
Des séquences définies d’ADN ou d’ARN grâce à des sondes marquées complémentaires de la cible.
Explication
L’hybridation in situ détecte des séquences précises d’ADN ou d’ARN par appariement avec des sondes d’acides nucléiques marquées et complémentaires. La localisation de protéines par des anticorps relève de l’immuno-histochimie.
La chaleur dénature les sondes et l’ADN cible, puis les sondes complémentaires s’hybrident si la séquence recherchée est présente.
Explication
La chaleur sépare les brins des sondes et de l’ADN cible, permettant ensuite l’appariement des séquences complémentaires. Un marquage apparaît lorsque la séquence recherchée est présente, contrairement à une fixation de sondes non complémentaires.
Mémorisez les réponses avec 66 flashcards sur Méthodes d’étude de la cellule.
Quelle plage de longueurs d'onde utilise la microscopie photonique ?
La lumière visible entre 390 et 760 nm.
Quelle résolution atteint un microscope photonique par transmission ?
Il observe des structures jusqu'à environ 0,2 μm.
Comment un microscope confocal produit-il des images tridimensionnelles ?
Par balayage laser et traitement informatique.
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