Qu'est-ce que la chromatographie liquide haute performance (CLHP) ?
Une technique analytique dérivée de la chromatographie sur colonne avec phase mobile liquide sous pression.
Quelle est la nature de la phase mobile en CLHP ?
La phase mobile est liquide et pompée sous pression.
Quelle est la différence de circulation de la phase mobile entre chromatographie classique et CLHP ?
En classique, elle s'écoule par gravité, en CLHP elle est forcée par une pompe.
Pourquoi la CLHP permet-elle plus de séparations difficiles que la CPG ?
Parce que les solutés interagissent avec la phase stationnaire et la phase mobile en CLHP.
Quelles phases stationnaires variées la CLHP permet-elle d'utiliser ?
Notamment celles pour l'échange d'ions et l'exclusion.
Comment les coefficients de diffusion dans les liquides comparent-ils à ceux dans les gaz ?
Ils sont 10^4 à 10^5 fois plus faibles dans les liquides.
Quel effet ont les faibles coefficients de diffusion dans les liquides sur la CLHP ?
Ils ralentissent les échanges entre phases et les séparations.
Pourquoi la CPG ne convient-elle pas aux substances peu volatiles ?
Parce qu'elles ont une masse molaire supérieure à 300 g·mol⁻¹ ou sont thermosensibles ou ionisées.
Que fait-on à la phase mobile avant de la pomper vers la colonne ?
Elle est filtrée et dégazée.
Qu'est-ce qui distingue l'élution isocratique du gradient d'élution ?
L'élution isocratique utilise une phase mobile de composition constante.
Comment varie la composition des solvants dans un gradient d'élution ?
Elle varie progressivement ou par paliers selon un programme établi.
Quelle pression maximale doivent fournir les pompes de CLHP ?
Elles doivent fournir jusqu'à 420 bars.
Quel débit doivent fournir les pompes de CLHP ?
Un débit entre 0,1 et 10 mL·min⁻¹.
Quelle caractéristique chimique doivent avoir les pompes de CLHP ?
Elles doivent avoir une bonne résistance à la corrosion.
Combien de pompes nécessite un système isocratique ?
Une seule pompe suffit.
Que nécessite un gradient de solvants pour le mélange sous haute pression ?
Une chambre de mélange basse pression ou plusieurs pompes.
Que fait l'échantillon lors de l'injection en CLHP ?
Il remplit la boucle à pression atmosphérique.
Que se passe-t-il après la commutation de la vanne en injection CLHP ?
L'échantillon est inséré rapidement dans le flux de phase mobile sans interruption.
Quel est le volume injecté typique en CLHP ?
Il est généralement compris entre 5 et 500 μL.
Quel volume injecté est utilisé sur l'appareil décrit ?
Le volume injecté vaut 30 μL.
Quelles sont les dimensions typiques d'une colonne de CLHP ?
Elle mesure de 3 à 25 cm de longueur et de 0,5 à 5 mm de diamètre intérieur.
Que contient une colonne de CLHP entre deux disques poreux ?
Une phase stationnaire.
Quelles sont les caractéristiques des microcolonnes en CLHP ?
Elles mesurent 5 cm de long et 0,3 mm de diamètre avec un débit limité à quelques μL·min⁻¹.
Quels avantages offrent les microcolonnes en CLHP ?
Elles consomment peu d’éluant et offrent une meilleure résolution.
Qu'est-ce que le gel de silice en chromatographie ?
Un matériau de remplissage formé de microsphères très polaires de 2 à 5 μm.
Comment obtient-on les silices greffées ?
En fixant covalemment des molécules organiques sur les fonctions silanols.
Quelle est la polarité de la phase stationnaire en phase normale ?
La phase stationnaire est polaire en phase normale.
Quelle est la polarité de la phase stationnaire en phase inverse ?
La phase stationnaire est apolaire en phase inverse.
Quels sont les greffons courants de la phase inverse ?
C2 diméthylsillyle, C8 octylsillyle, C18 octadécylsillyle et φ phénylsillyle.
Qu'est-ce qu'un détecteur en CLHP ?
Un détecteur fournit un signal électrique continu reflétant les variations de composition de l’éluat.
Quelles qualités doit avoir un bon détecteur en CLHP ?
Il doit être proportionnel, sensible, rapide, stable, avec faible volume mort et peu de bruit.
Que mesure un détecteur UV en CLHP ?
Il mesure l’absorbance à une ou plusieurs longueurs d’onde.
Quelle information supplémentaire fournit un détecteur à barrette de diodes ?
Il fournit des informations spectrales utiles à l’identification.
Que mesure un détecteur réfractométrique en CLHP ?
Il mesure la différence d’indice de réfraction entre la phase mobile et l’effluent.
Pourquoi un détecteur réfractométrique est-il peu adapté au gradient ?
La variation de composition provoque une dérive de la ligne de base.
Quelle est la sensibilité d’un détecteur réfractométrique ?
Il est peu sensible.
Quel compromis cherche l'optimisation d'une séparation en CLHP ?
Entre une bonne résolution et un temps d'analyse court.
Quels paramètres agissent sur l'optimisation d'une séparation en CLHP ?
La colonne, la phase mobile, le débit et la température.
Quels critères déterminent le choix d'une colonne en CLHP ?
La phase stationnaire, la longueur, le diamètre intérieur et le diamètre des particules.
Quels facteurs influencent fortement l'efficacité de la séparation en CLHP ?
La composition, la polarité, le pH de la phase mobile et le débit.
Quelle température peuvent atteindre les chromatographes liquides modernes ?
Plus de 120 °C.
Quelles conditions doivent être remplies pour utiliser des températures supérieures à 120 °C en CLHP ?
La phase stationnaire et les solutés doivent résister à cette température.
Quels avantages apporte une température élevée en CLHP ?
Réduction du temps d'analyse et amélioration de la symétrie des pics.
Qu'indique une bonne séparation chromatographique ?
Des pics distincts et reproductibles.
Quelles informations doit préciser chaque analyse chromatographique ?
La colonne, l’éluant, le débit, le mode de détection, la quantité injectée et les réglages pertinents.
Qu'est-ce que l’étalonnage externe en chromatographie ?
Une méthode qui détermine la masse ou concentration par une courbe aire = f(masse ou concentration).
Comment fonctionne la méthode des ajouts dosés ?
On ajoute des quantités connues au produit et on relie la variation d’aire à la quantité ajoutée.
Quelles sont les conditions pour un étalon interne en chromatographie ?
Il doit être pur, inerte, absent de l’échantillon, séparé par temps de rétention et détecté comparablement.
À quels mélanges s'applique la normalisation interne ?
Aux mélanges dont tous les constituants sont identifiés par des pics séparés avec un composé de référence présent.
Quelle technique est utilisée pour déterminer la pureté d’un produit brut de synthèse ?
Une CLHP de partage en phase inverse avec silice apolaire, acétonitrile-eau isocratique, détection UV 254 nm et étalon interne.
Teste tes connaissances avec un QCM de 24 questions sur Chromatographie liquide haute performance.
1. Quelle caractéristique distingue fondamentalement la CLHP de la chromatographie sur colonne classique ?
2. Une séparation réalisée sur une colonne classique s’effectue lentement par gravité, tandis qu’une séparation en CLHP repose sur quel principe ?
Révisez le cours complet dans la fiche de révision de Chromatographie liquide haute performance.
Voir la fiche →Importe ton cours et l'IA génère des flashcards en 30 secondes.
Générateur de flashcards