Combien de gènes comprend environ le génome nucléaire ?
Environ 20 000 à 30 000 gènes.
Combien de protéines différentes le protéome comprend-il environ ?
Environ 500 000 protéines différentes.
Quel est le caractère du génome par rapport au transcriptome et au protéome ?
Le génome est stable, contrairement au transcriptome et au protéome, qui sont dynamiques.
Qu’est-ce qui varie entre les tissus malgré un génome identique ?
L’expression des gènes.
Qu’est-ce qu’une matrice en biologie ?
Le milieu biologique dans lequel les protéines sont dosées.
Dans quels milieux biologiques les protéines peuvent-elles être étudiées ?
Dans le plasma ou le sérum, les urines, le liquide céphalo-rachidien, les liquides d’épanchement, les tissus ou biopsies, les cellules en culture, les extraits bactériens et les surnageants de culture cellulaire.
À quoi les méthodes de dosage des protéines doivent-elles être adaptées ?
À la matrice analysée.
Qu’est-ce qu’un antigène ?
Une protéine reconnue par le système immunitaire et détectable par des anticorps.
Qu’est-ce qu’un épitope ?
Une région exposée et immunogénique d’une protéine, reconnue par un anticorps spécifique.
Combien d’acides aminés environ composent un épitope ?
Environ 12 à 20 acides aminés.
Qu’est-ce qui détermine la spécificité de reconnaissance d’un épitope par un anticorps ?
Les régions hypervariables des chaînes lourdes et légères.
Que reconnaissent les anticorps polyclonaux et monoclonaux ?
Les polyclonaux reconnaissent plusieurs épitopes d’une protéine, tandis qu’un monoclonal cible un épitope unique.
Que détecte le Western Blot sur une membrane ?
Une protéine immobilisée à l’aide d’anticorps.
Quelles sont les trois étapes du Western Blot ?
Séparation par SDS-PAGE, transfert sur membrane, puis révélation avec des anticorps primaires et secondaires.
Selon quel critère les protéines sont-elles séparées en SDS-PAGE ?
Selon leur taille, car le SDS leur confère une charge négative uniforme.
Quels trois facteurs déterminent la séparation en SDS-PAGE ?
La taille des protéines, le pourcentage de polyacrylamide et le tampon utilisé.
Quelles structures l’électrophorèse native préserve-t-elle ?
Les structures tertiaires et parfois quaternaires des protéines, ainsi que leurs complexes associés.
Selon quels paramètres les protéines se séparent-elles en électrophorèse native ?
Selon leur charge, leur forme et leur taille.
Quelles sont les étapes du Western Blot, dans l’ordre ?
Transfert, saturation, incubation avec l’anticorps primaire, lavage, incubation avec l’anticorps secondaire marqué, lavage et révélation.
Que transforme la peroxydase HRP en lumière en présence d’eau oxygénée ?
Le luminol.
Que permet le multiplexage en Western Blot ?
Détecter plusieurs protéines simultanément avec différents anticorps primaires et des anticorps couplés à des fluorochromes distincts.
Dans l’exemple de Western Blot, comment varie la quantité de p-AKT ?
Elle varie selon les conditions.
Selon quels critères l’électrophorèse bidimensionnelle sépare-t-elle les protéines ?
Selon leur point isoélectrique puis leur poids moléculaire.
Quelle méthode constitue la première dimension de l’électrophorèse bidimensionnelle ?
L’électrofocalisation dans un gradient de pH.
Quand les protéines s’immobilisent-elles pendant l’électrofocalisation ?
Lorsqu’elles atteignent leur pHi et deviennent électriquement neutres.
Quelles sont les deux fonctions de la chromatographie ?
Séparative et analytique, qualitative et quantitative.
Quelles phases entraînent et traversent les analytes en chromatographie ?
Une phase mobile liquide ou gazeuse traverse une phase stationnaire.
Que désigne l’élution en chromatographie ?
La sortie de la colonne.
En gel filtration, quelles molécules les billes poreuses retiennent-elles ?
Les petites molécules.
En gel filtration, dans quel ordre les protéines et molécules sortent-elles ?
Les grosses protéines, puis les molécules moyennes, puis les petites.
Quelle charge porte la phase stationnaire en échangeuse d’anions ?
Une charge positive.
En chromatographie échangeuse de cations, dans quel ordre les protéines éludent-elles selon leur pHi ?
Des pHi les plus faibles aux pHi les plus élevés.
Que permet de déterminer la détection in situ des protéines dans les tissus ?
Leur localisation exacte, par exemple membranaire ou nucléaire.
À quelle épaisseur une biopsie est-elle coupée en immunohistochimie ?
À 5 microns.
Quel traitement permet de démasquer les antigènes lors d’une préparation immunohistochimique ?
Le chauffage du tissu perméabilisé.
Quelle relation la loi de Beer-Lambert établit-elle entre absorbance et concentration ?
Quel complexe coloré la réaction de Biuret forme-t-elle en milieu alcalin ?
Un complexe violet entre les liaisons peptidiques et le cuivre.
Comment un immunodosage en phase liquide forme-t-il un réseau antigène-anticorps trouble ?
Des anticorps en solution reconnaissent les épitopes et certains relient deux protéines.
Quelle lumière la turbidimétrie mesure-t-elle à travers une solution ?
La lumière transmise.
Comment la concentration en protéines modifie-t-elle la lumière transmise en turbidimétrie ?
Elle la diminue en augmentant le trouble.
Quelle lumière la néphélémétrie mesure-t-elle dans une solution trouble ?
La lumière dispersée.
Quelle méthode est plus sensible et privilégiée pour l’analyse : la néphélémétrie ou la turbidimétrie ?
La néphélémétrie.
Comment le signal néphélémétrique varie-t-il avec la concentration en protéines ?
Il augmente proportionnellement à la concentration en protéines.
Que détecte l’ELISA sandwich entre deux anticorps ?
Une protéine.
Quelles protéines l’ELISA sandwich peut-il révéler ?
Les protéines suffisamment grosses et possédant au moins deux épitopes.
Que reconnaît l’anticorps de capture dans l’ELISA sandwich ?
Un premier épitope, pour immobiliser la protéine.
Quelle chaîne de l’HCG permet un dosage spécifique de cette hormone ?
La chaîne bêta, car elle varie d’une hormone à l’autre.
Dans quel ordre l’information génétique est-elle exprimée ?
Du génome à l’ARN messager, puis aux protéines.
Quel rôle jouent les modifications post-traductionnelles dans le protéome ?
Elles contribuent à sa diversité.
Pourquoi les protéines sont-elles difficiles à étudier ?
Elles ne sont pas amplifiables, sont très hétérogènes et présentent de grandes différences de concentration.
Comment obtient-on le plasma ou le sérum après une prise de sang ?
En séparant les cellules sanguines du surnageant.
Comment prélève-t-on le liquide céphalo-rachidien ?
Par ponction lombaire.
De quelles chaînes un anticorps est-il formé ?
De deux chaînes lourdes et de deux chaînes légères reliées par des ponts disulfures.
Quelle est la fonction du fragment Fc d’un anticorps ?
Il assure la transduction du signal et sert à détecter les anticorps.
Quel agent rompt les ponts disulfures en SDS-PAGE ?
Le DTT, un agent réducteur.
Où se retrouvent les petites protéines dans un gel de polyacrylamide ?
En bas du gel.
Quelles informations l’électrophorèse native permet-elle d’étudier sur les protéines ?
Les complexes protéiques, le nombre de monomères associés et le nombre de chaînes polypeptidiques.
Combien de bandes l’insuline forme-t-elle en électrophorèse native ?
Une seule bande.
À quoi correspond la masse de la bande d’insuline en électrophorèse native ?
À la somme des masses de ses chaînes A et B.
Vers quel pôle migrent les protéines avant leur rétention sur membrane ?
Du pôle négatif vers le pôle positif.
Quelles membranes retiennent les protéines après leur migration électrique ?
Les membranes de nitrocellulose ou de PVDF.
Quel est le rôle de la saturation dans le Western Blot ?
Elle bloque les sites de fixation non spécifiques de la membrane.
Quelle partie de l’anticorps primaire l’anticorps secondaire reconnaît-il ?
Le fragment Fc.
Quelles marques la lumière produit-elle sur un film radiosensible lors d’une révélation au luminol ?
Des taches noires.
Qu’est-ce qu’un fluorochrome ?
Une molécule qui réémet, après excitation, une lumière de longueur d’onde supérieure.
Que révèle une quantité de lumière plus importante en Western Blot ?
Une quantité de protéines plus élevée.
Que permettent d’étudier les anticorps en Western Blot ?
Des protéines spécifiques, y compris modifiées après traduction, et des voies de signalisation.
Dans l’exemple de Western Blot, à quoi sert AKT ?
À la normalisation.
Pourquoi le Western Blot est-il relativement peu utilisé en routine hospitalière ?
Parce qu’il est fastidieux.
Vers quel pôle migrent les protéines acides dans un gradient de pH ?
Vers le pôle positif.
Quel critère la deuxième dimension utilise-t-elle pour séparer les protéines ?
Leur poids moléculaire.
Que représente chaque spot produit par l’électrophorèse bidimensionnelle ?
Une protéine ou un monomère.
Que produit la HRP conjuguée à l’anticorps secondaire en immunohistochimie ?
Un marquage marron lorsque les protéines sont présentes en quantité importante.
Où apparaît le marquage marron de HER2 dans certaines cellules d’une tumeur du sein ?
À la membrane.
Combien de marqueurs l’immunohistochimie utilise-t-elle à la fois ?
Un seul marqueur.
Comment l’immunofluorescence permet-elle de distinguer plusieurs marqueurs ?
Elle utilise des fluorochromes excités à différentes longueurs d’onde.
Quelles méthodes dosent les protéines totales, contrairement aux immunodosages spécifiques ?
Bradford et Biuret.
Comment détermine-t-on la concentration d’un échantillon par étalonnage de Bradford ?
À partir de son absorbance et de la courbe d’étalonnage.
Quand le dosage de Bradford devient-il inexact ?
Lorsque la concentration dépasse la zone de linéarité de la courbe d’étalonnage.
En ELISA, où l’antigène ou l’anticorps est-il immobilisé ?
Sur une phase solide.
Quelles formes peut prendre la phase solide en ELISA ?
Une plaque ou des billes.
En ELISA direct, que reconnaît l’anticorps ?
L’antigène immobilisé.
En ELISA direct, de quoi dépend l’augmentation du signal ?
De la quantité d’antigène immobilisé et d’anticorps fixé.
En ELISA indirect, que mesure-t-on lorsque l’antigène est immobilisé ?
Les anticorps qui s’y fixent, détectés et quantifiés.
Comment l’ELISA indirect recherche-t-il une allergie au lait ?
Il détecte et quantifie les anticorps du patient fixés aux allergènes correspondants.
Quelle est la composition de l’HCG ?
Un dimère formé d’une chaîne alpha et d’une chaîne bêta.
Quel marqueur peut être dosé pour suivre un cancer des testicules ?
Un excès de chaîne bêta libre d’HCG.
En combien de chaînes l’insuline se sépare-t-elle en SDS-PAGE ?
En deux chaînes.
À quelle longueur d’onde mesure-t-on l’absorbance lors du dosage de Bradford ?
À 595 nm.
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1. Lors de la mise au point d’un ELISA sur phase solide, quelles propositions décrivent correctement les supports et les formats direct et indirect ?
2. Une expérience doit comparer simultanément plusieurs protéines par Western Blot ; quelles propositions sont exactes ?
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