De quels éléments les protéines sont-elles assemblées ?
D’acides aminés reliés par des liaisons peptidiques.
Que désigne la structure primaire d’une protéine ?
Sa séquence en acides aminés.
Quelle séquence détermine la structure primaire d’une protéine ?
La séquence du gène codant.
Que désigne la structure tertiaire d’une protéine ?
Le repliement spatial de sa structure secondaire.
Quels éléments interagissent dans la structure tertiaire d’une protéine ?
Les radicaux des acides aminés.
Comment se forme la structure quaternaire d’une protéine ?
Par l’association de plusieurs sous-unités ayant chacune une structure tertiaire.
Qu’est-ce que l’électrophorèse ?
Une méthode de fractionnement et d’analyse par migration différentielle de particules chargées dans un champ électrique.
Quelles sont les quatre étapes d’une électrophorèse sur support ?
Préparer le support, déposer les échantillons, appliquer un courant, puis révéler les molécules.
Quelle relation donne la vitesse de migration à l’état stationnaire ?
Quelle relation définit la mobilité électrophorétique ?
Qu’est-ce que le point isoélectrique d’une molécule ?
Le pH auquel sa charge globale est nulle et où elle ne migre pas dans un champ électrique.
Vers quelle électrode migre une molécule négative lorsque le pH dépasse son pHi ?
Vers l’anode.
Vers quelle électrode migre une molécule positive lorsque le pH est inférieur à son pHi ?
Vers la cathode.
De quoi dépend la charge nette d’une protéine ?
De sa composition en acides aminés et du pH de la solution.
Quelles fonctions ionisables contribuent à la charge nette d’une protéine ?
Les extrémités N-terminale et C-terminale ainsi que les radicaux d’Asp, Glu, Lys, Arg et His.
Dans un gel tamis moléculaire, quelles macromolécules migrent le moins vite ?
Les macromolécules les plus grosses.
Que préserve l’électrophorèse native des protéines ?
Leur structure tridimensionnelle.
Quel est l’effet du SDS sur les chaînes polypeptidiques ?
Il les déplie et les enveloppe de charges négatives répulsives.
En SDS-PAGE, dans quel sens migrent les protéines dénaturées ?
Du puits côté cathode vers l’anode.
Que fait le western blot aux protéines séparées par électrophorèse ?
Il les transfère sur une membrane et les détecte avec des anticorps spécifiques.
Quelle condition rend possible l’analyse semi-quantitative par témoin de charge ?
Les bandes du témoin doivent être équivalentes dans tous les puits.
À quoi est proportionnelle l’intensité du marquage en western blot ?
À la quantité de protéines.
Comment la chromatographie sépare-t-elle les constituants d’un mélange ?
Par migration différentielle entre une phase mobile et une phase stationnaire, selon leur répartition entre ces phases.
Quel rôle joue la phase stationnaire en chromatographie ?
Elle retient les molécules.
Quels facteurs influencent la vitesse des molécules en chromatographie ?
Leur solubilité, leur charge, leur polarité, leur taille, leur forme et leurs sites particuliers.
Quels sont les principaux mécanismes de chromatographie ?
L’adsorption, l’affinité, l’échange d’ions, l’exclusion et le partage.
Selon quel critère la chromatographie d’échange d’ions retient-elle les molécules ?
Selon leur charge.
Que sépare la chromatographie sur couche mince ?
Des molécules.
Que caractérise le rapport frontal ?
La migration d’un soluté par rapport au front du solvant.
De quels paramètres dépend la spécificité du rapport frontal ?
D’un support et d’un solvant définis, à température donnée.
Comment l’immunomarquage localise-t-il une protéine ?
Par la reconnaissance spécifique d’une partie de la protéine par des anticorps associés à un marqueur détectable.
Que code un gène rapporteur observable en laboratoire ?
Un produit détectable, par fluorescence ou activité enzymatique.
À quoi sert un gène rapporteur associé à un gène d’intérêt ?
À visualiser ou mesurer l’expression du gène d’intérêt.
Qu’est-ce que la mutagenèse dirigée ?
Une mutation localisée de l’ADN qui modifie une protéine en un site précis.
Quelles propriétés protéiques la mutagenèse dirigée permet-elle d’évaluer ?
Le rôle d’un résidu dans une interaction, la forme, la localisation ou la fonction de la protéine.
Que révèle une forte conséquence structurale ou fonctionnelle après modification d’un acide aminé ?
Cet acide aminé est particulièrement important pour la structure ou la fonction étudiée.
En quoi consiste la transgenèse ?
À insérer un gène étranger dans un génome et à permettre son expression.
Qu’étudie-t-on grâce à l’expression d’un gène étranger en transgenèse ?
Les conséquences fonctionnelles de la protéine correspondante.
Sur quelles interactions repose la structure secondaire d’une protéine ?
Sur des interactions entre les liaisons peptidiques.
Quel élément de l’acide aminé n’intervient pas dans la structure secondaire ?
Les radicaux des acides aminés.
Quelles propriétés doit avoir un support solide d’électrophorèse ?
Il doit être homogène, poreux et aussi inerte que possible.
Quels matériaux peuvent constituer un support solide d’électrophorèse ?
Le papier, l’acétate de cellulose, le polyacrylamide ou l’agarose.
Quels paramètres déterminent la séparation obtenue par électrophorèse ?
Le champ électrique et la durée de migration.
Quelle force électrique agit sur une particule de charge dans un champ ?
Quel effet a un écart absolu plus grand entre le pH du milieu et le pHi ?
La charge de la molécule est plus importante.
Que sépare une électrophorèse sur support à mailles lâches ?
Les protéines selon leur charge.
Comment la mobilité électrophorétique des acides nucléiques varie-t-elle avec leur taille ?
Elle reste constante.
Quels composés forment le polyacrylamide utilisé en PAGE ?
L’acrylamide polymérisé et le bis-acrylamide réticulant.
De quoi dépend la taille des mailles d’un gel de polyacrylamide ?
Des proportions d’acrylamide et de bis-acrylamide.
Quelles propriétés le pourcentage d’agarose détermine-t-il dans un gel ?
Son maillage et son pouvoir de séparation.
Comment estime-t-on la masse moléculaire d’une protéine en SDS-PAGE ?
On utilise une courbe d’étalonnage établie avec des marqueurs de masses connues et la distance de migration de la protéine.
Que reconnaissent les anticorps primaires en western blot ?
La protéine recherchée.
Quel marqueur détectable portent les anticorps secondaires en western blot ?
Un marqueur fluorescent, radioactif ou enzymatique.
Combien de protéines l’électrophorèse bidimensionnelle peut-elle individualiser sur un grand gel ?
Plusieurs centaines de protéines.
Selon quels paramètres les spots d’électrophorèse bidimensionnelle sont-ils répartis ?
Selon la masse moléculaire apparente et le pHi.
Quels états peuvent prendre les phases mobile et stationnaire en chromatographie ?
La phase mobile est un liquide ou un gaz, et la phase stationnaire un solide ou un liquide fixé.
Quelle quantité les méthodes chromatographiques peuvent-elles séparer ?
Des quantités de l’ordre du μg.
En chromatographie d’exclusion, pourquoi les petites molécules sont-elles retardées ?
Elles passent dans les pores de la phase stationnaire.
Pourquoi sature-t-on la cuve en vapeur de solvant en chromatographie sur couche mince ?
Pour limiter l’évaporation de la phase mobile depuis la plaque.
Quelle est la seconde étape d’une chromatographie bidimensionnelle sur couche mince ?
Une migration perpendiculaire avec un autre système de solvants.
Comment peut-on révéler les spots incolores d’une chromatoplaque ?
Par une réaction colorée, une fluorescence ou une autoradiographie après radiomarquage.
Quelles méthodes permettent l’analyse quantitative des spots en chromatographie sur couche mince ?
La planimétrie, l’élution suivie d’un dosage, la densitométrie ou la mesure de la radioactivité.
Quel effet les anticorps secondaires peuvent-ils avoir sur l’immunomarquage ?
Ils peuvent en augmenter la sensibilité et la visibilité.
Que révèle la superposition d’images obtenues avec différents fluorochromes ?
Une colocalisation possible de molécules.
Comment un gène rapporteur peut-il s’exprimer au même endroit que le gène étudié ?
Il peut être fusionné au gène étudié ou placé sous le contrôle de son promoteur.
Quel gène une expérience de transgenèse peut-elle réintroduire après un knock-out ?
Un gène préalablement invalidé.
Quels niveaux d’expression une expérience de transgenèse peut-elle induire pour un gène d’intérêt ?
Une surexpression ou une sous-expression.
Comment l’électrophorèse bidimensionnelle sépare-t-elle les protéines selon leur pHi ?
Par focalisation isoélectrique dans un gradient de pH.
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1. Dans une protéine, par quel type de liaison les acides aminés sont-ils reliés entre eux ?
2. Une mutation modifie la séquence du gène codant pour une protéine et entraîne le remplacement d’un acide aminé. Quel niveau structural est directement défini par cette séquence en acides aminés ?
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