Que désigne une expérience in vitro ?
Une expérience réalisée hors d’un organisme.
Quelle durée de vie caractérise les cellules primaires ?
Une durée de vie limitée.
Quel moyen transfère du matériel génétique lors d’une transduction ?
Un virus modifié.
Sur quoi repose une transfection stable ?
Sur l’intégration du plasmide au génome et la sélection des cellules.
À quelles conditions de température et d’atmosphère s’effectue la culture cellulaire de base ?
À 37 °C, sous 5 % de CO₂ et en atmosphère humide.
Quel effet la privation de sérum a-t-elle sur les cellules ?
Elle les bloque en G0/G1.
Quelle expression convient à la transfection transitoire ?
Une expression rapide de quelques jours.
Quelles étapes suivent le mélange du plasmide et du réactif en lipofection ?
Les lipoplexes sont ajoutés aux cellules, le milieu est changé quelques heures après, puis l’expression est analysée à 24–48 h.
Quelles propriétés des protéines le Western blot détecte-t-il et compare-t-il ?
Leur quantité et leur taille.
Quelles étapes suivent la séparation des protéines dans un Western blot ?
Le transfert sur membrane, la reconnaissance par un anticorps spécifique et la révélation de cet anticorps.
Que révèle l’intensité d’une bande en Western blot ?
La quantité relative de protéine de manière semi-quantitative.
À quoi sert le fractionnement cellulaire ?
À attribuer une protéine à un compartiment ou à distinguer ses formes.
Que sépare la centrifugation à environ 600–1 000 g lors du fractionnement cellulaire ?
Elle élimine les noyaux et les débris.
Que révèle le cytochrome c dans le cytosol ?
L’ouverture de la membrane externe mitochondriale et l’engagement de l’apoptose.
Que montre la colocalisation de deux protéines ?
Elles se trouvent au même endroit.
Qu’isole l’immunoprécipitation à partir d’un lysat ?
Une protéine et les molécules qui lui sont associées.
À quoi sert le GST pull-down avec une protéine GST-X ?
À tester une interaction avec une protéine candidate.
Que révèle la ChIP sur une région précise de l’ADN ?
La fixation d’une protéine ou d’une marque d’histone dans la cellule.
Quels marqueurs l’immunofluorescence utilise-t-elle pour localiser une protéine ou étudier la morphologie cellulaire ?
Des anticorps marqués par des fluorochromes.
Qu’observe la microscopie électronique à transmission à résolution nanométrique ?
L’ultrastructure, notamment les mitochondries et les autophagosomes.
Quelles propriétés la cytométrie en flux mesure-t-elle cellule par cellule ?
La fluorescence et la diffusion.
Que renseigne la diffusion avant (FSC) en cytométrie ?
La taille cellulaire.
Que contrôle un marquage simple en cytométrie ?
La compensation.
Que mesure le comptage cellulaire dans l’évaluation de la prolifération ?
Le nombre de cellules.
Quel colorant sert à visualiser les colonies dans le test clonogénique ?
Le cristal violet.
Que révèle un pic sub-G1 après fixation et marquage à l’IP en cytométrie ?
Des cellules à ADN fragmenté devenu hypodiploïde.
Quels clivages indiquent l’activation des caspases dans l’apoptose ?
Le clivage de PARP en un fragment de 85 kDa et celui de la caspase-9.
Quels indices étayent la voie mitochondriale de l’apoptose ?
La perte de ΔΨm, la libération du cytochrome c et l’activation de la caspase-9.
Quelles deux causes peuvent expliquer une hausse de LC3-II ?
Une formation accrue d’autophagosomes ou un blocage de leur dégradation lysosomale.
Que signifie une hausse supplémentaire de LC3-II après ajout de chloroquine ?
Un flux autophagique actif.
Quels indices permettent de détecter la mitophagie ?
La colocalisation de LC3 avec TOM20 ou MitoTracker, des mitochondries dans des autophagosomes en MET et une perte de masse mitochondriale.
Que suggère une baisse de fluorescence des sondes mitochondriales rhodamine 123, DiOC6, TMRE et TMRM ?
Une dépolarisation mitochondriale.
Quels éléments sont nécessaires à l’amplification par PCR ?
Une matrice, deux amorces, une polymérase thermostable et des dNTP.
Que devient l’ARN extrait au début d’une RT-PCR ?
Il est rétrotranscrit en ADNc.
Que révèle un Ct faible en qPCR sur la matrice initiale ?
La quantité initiale de matrice est plus élevée.
Dans le test de détachement à la trypsine, que traduit un détachement rapide ?
Une adhérence plus faible à la matrice.
En turbidimétrie, que provoque la polymérisation de tubuline sur l’absorbance ?
L’absorbance augmente.
Quel effet le taxol exerce-t-il sur les microtubules ?
Il les stabilise en empêchant leur dépolymérisation.
Que transplante une xénogreffe tumorale chez une souris immunodéficiente ?
Des cellules humaines.
Quelles capacités définissent une cellule souche tumorale ?
L’auto-renouvellement, la différenciation et l’initiation tumorale.
Qu’est-ce qui distingue les réplicats biologiques des réplicats techniques ?
Les biologiques sont des expériences indépendantes, tandis que les techniques sont des mesures répétées du même échantillon.
Quel seuil de valeur p indique une significativité statistique ?
Une valeur p inférieure à 0,05.
Que peuvent faire les cellules initiatrices de tumeur après une greffe ?
Elles peuvent reformer une tumeur.
Quel rôle joue l’origine de réplication d’un plasmide d’expression ?
Elle permet la multiplication du plasmide dans E. coli.
Comment les lignées cellulaires sont-elles authentifiées ?
Par empreinte STR.
Quelle est la première étape pour sélectionner des cellules résistantes à un médicament ?
Appliquer une faible dose non létale.
Comment les cellules souches tumorales sont-elles isolées avant leur culture en sphères ?
Par FACS avec des marqueurs de surface comme EpCAM/CD133 ou CD44/CD24.
Combien de clones indépendants conserver après un clonage monoclonal pour exclure un effet du site d’insertion ?
Au moins 2 clones indépendants.
Que vérifie-t-on pour valider une extinction par siRNA ou shRNA ?
La baisse de l’ARNm par RT-qPCR et de la protéine par WB.
Qu’est-ce qu’un sauvetage après extinction d’un gène ?
La réintroduction du gène dans les cellules où il a été éteint.
Quel effet le SDS exerce-t-il sur les protéines en SDS-PAGE ?
Il les dénature et leur confère une charge négative proportionnelle à leur taille.
Pourquoi doser les protéines avant leur dépôt en Western blot ?
Pour charger la même quantité de protéines par puits.
Que produit le substrat ECL au niveau de la HRP ?
De la lumière.
Comment sépare-t-on les noyaux du cytoplasme par fractionnement cellulaire ?
On gonfle les cellules en tampon hypotonique, on rompt leur membrane plasmique, puis on centrifuge lentement.
Que contient la fraction P lors de la séparation P/S/T de la tubuline ?
Les microtubules assemblés.
Comment le taxol permet-il la cosédimentation des protéines liées aux microtubules ?
Il stabilise et polymérise les microtubules, qui culottent après ultracentrifugation à 100 000 g pendant 1 h avec les protéines fixées.
Quelles conditions préservent les interactions lors de la lyse pour une IP ?
Des conditions non dénaturantes.
Quelle fraction du lysat constitue l’input d’une IP ?
De 5 à 10 % du lysat avant IP.
Quel est le premier geste de l’immunofluorescence sur cellules fixées ?
Fixer les cellules au paraformaldéhyde ou au méthanol.
Que recueille le diaphragme pinhole en microscopie confocale ?
La lumière du plan focal.
Quelle couleur peut résulter de la superposition des signaux rouge et vert ?
Le jaune.
Combien de cellules faut-il compter au minimum par condition pour une quantification fiable en microscopie ?
Au moins 100 cellules.
Quelle est l’épaisseur des coupes ultrafines destinées à la MET ?
De 55 à 60 nm.
Quelle est la longueur moyenne des mitochondries après un knockout de Drp1 ?
1,26 µm, contre 0,53 µm auparavant.
Que révèle en MET un autophagosome contenant une mitochondrie ?
Une mitophagie.
Quel alignement la focalisation hydrodynamique réalise-t-elle en cytométrie ?
Elle aligne les cellules une par une devant le laser.
Que permet le tri cellulaire par cytométrie ?
De collecter une sous-population vivante.
Que mesure l’absorbance du formazan dans le test MTT ?
Le nombre de cellules métaboliquement actives.
À quoi la luminescence de l’ATPlite est-elle proportionnelle ?
À la quantité d’ATP présente.
Comment calcule-t-on la fraction de survie dans le test clonogénique ?
Nombre de colonies traitées divisé par le produit du nombre de cellules ensemencées et de l’efficacité de clonage du témoin.
Que détecte TUNEL in situ et par quel mécanisme ?
Les cassures de l’ADN, par ajout de dUTP fluorescents aux extrémités 3′-OH grâce à la TdT.
Que suggère le blocage de la mort cellulaire par zVAD-fmk ?
Cette mort cellulaire dépend des caspases.
Quel changement de distribution de GFP-LC3 révèle des autophagosomes visibles ?
GFP-LC3 passe d’une distribution cytosolique diffuse à des puncta verts.
Que suggère une baisse de l’ADNmt sans baisse de Ppargc1a ni de Tfam ?
Une perte mitochondriale par mitophagie plutôt qu’une baisse de biogenèse.
Que mesure la cytométrie cellule par cellule, sans révéler ?
La fluorescence, sans sa localisation spatiale.
Que devient le rapport rouge/vert de JC-1 lorsque le ΔΨm chute ?
Il diminue, indépendamment de la masse mitochondriale.
Quel effet le FCCP ou le CCCP produit-il sur le ΔΨm ?
Il le dissipe.
Quel est l’ordre des injections dans le Mito Stress Test ?
Oligomycine, FCCP, puis roténone et antimycine A.
Quelles températures caractérisent les étapes d’un cycle de PCR ?
95 °C pour la dénaturation, 50–60 °C pour l’hybridation et 72 °C pour l’élongation.
À quoi compare la quantification relative ΔΔCt la valeur normalisée du gène cible ?
À la condition témoin.
Quelles propriétés cellulaires mesure la microscopie de force atomique ?
La topographie, l’élasticité et la force d’adhésion.
En microscopie de force atomique, que mesure la force nécessaire pour décoller la pointe ?
La force d’adhésion cellulaire.
Quel élément détermine surtout la rigidité cellulaire ?
L’actine corticale.
Que mesure le test de Boyden ?
La migration à travers les pores d’une membrane vers un chimio-attractant.
Quelles phases présente la courbe turbidimétrique de polymérisation de la tubuline ?
La nucléation, l’élongation et un plateau.
Quel effet SSRP1 exerce-t-elle sur les faisceaux et réseaux de microtubules in vitro ?
Elle favorise des faisceaux plus épais et des réseaux plus denses.
Quel aspect Tat et SSRP1 produisent-elles dans le réseau de microtubules ?
Un aspect de type taxol.
Où une greffe orthotopique tumorale est-elle réalisée ?
Dans l’organe d’origine.
Quels éléments les modèles tumoraux in vivo intègrent-ils ?
Le microenvironnement, la vascularisation et le système immunitaire.
Que teste la formation de tumorsphères in vitro ?
L’auto-renouvellement.
Comment les résultats sont-ils présentés, et quel nombre d’expériences indépendantes est généralement requis ?
Moyenne ± SD ou SEM, avec généralement au moins trois expériences indépendantes.
Quel test statistique compare deux groupes ?
Le test t de Student.
Quelles cellules le passage sur laine de nylon retient-il ?
Les cellules B adhérentes et les macrophages.
Quelle limite caractérise l’analyse par MET par rapport aux méthodes quantitatives ?
Elle observe peu de cellules mortes et fixées.
À quelles données sont associés TCGA, GSE et COSMIC/Oncotator ?
TCGA aux données tumorales, GSE aux jeux d’expression publics et COSMIC/Oncotator aux mutations.
Après une transfection stable, quand et à quelle concentration ajoute-t-on la puromycine ?
Après 2 jours, à 0,5 µg/mL.
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1. Une équipe observe directement un tissu, prélève d’autres cellules pour les étudier et cultive une lignée :
2. Une équipe compare une transfection non virale, une expression plasmidique temporaire et plusieurs éléments d’un plasmide :
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