QCM : Microscopie et méthodes cellulaires — 25 questions

Explication

Une expérience fiable nécessite la maîtrise des conditions, un groupe contrôle, une preuve et une contre-preuve. Ces éléments permettent de mieux établir la validité du résultat expérimental.

Explication

En microscopie à transmission, la lumière traverse un objet suffisamment fin, souvent une coupe colorée de tissu. La coloration améliore la visibilité mais nécessite une fixation, tandis que le contraste de phase permet d’observer des cellules vivantes sans coloration.

Explication

Le DAPI est un fluorochrome qui s’intercale entre les bases de l’ADN et présente une affinité pour les bases A et T. Après excitation par une lumière UV, il révèle les noyaux en bleu; la colocalisation de fluorescences verte et rouge produit du jaune.

Explication

En MET, les sels de métaux lourds se fixent plus ou moins aux structures et créent ainsi des contrastes. Ils empêchent localement la transmission des électrons, contrairement à une action homogène sur toute la coupe.

Explication

Une molécule d’intérêt peut être repérée par une caractéristique qui lui est propre, comme une protéine chimère avec la GFP. Elle peut aussi être détectée par la liaison spécifique d’une molécule repérable, notamment le DAPI ou un anticorps marqué.

Explication

Le Western blot suit une succession d’étapes : extraction, dénaturation, séparation par SDS-PAGE, transfert membranaire, immunodétection et révélation. Le SDS-PAGE sépare les protéines, tandis que les anticorps assurent leur détection spécifique.

Explication

Le microscope photonique emploie des photons et possède une résolution d’environ $0,2\ \mu\text{m}$. Le microscope électronique emploie des électrons et atteint environ $0,2\ \text{nm}$, soit une résolution environ 1 000 fois supérieure.

Explication

Dicer transforme le long ARN double brin en siARN de 20 à 25 paires de bases. Le complexe RISC utilise ensuite le brin antisens pour reconnaître et cliver l’ARNm cible, empêchant sa traduction.

Explication

La cytométrie en flux renseigne sur la taille, la structure interne, la granularité et la fluorescence des cellules. Le FSC est associé à la taille, tandis que le SSC renseigne sur la granularité et la structure interne.

Explication

Les virus sont invisibles en microscopie photonique mais observables en microscopie électronique. Leur taille est intermédiaire entre celle d’une molécule d’hémoglobine et celle d’un ribosome.

Explication

La cytométrie en flux fait défiler les particules en suspension une par une devant un laser, puis analyse les modifications optiques du faisceau. Elle ne correspond donc pas à une mesure globale de toute la suspension.

Explication

Le filtre d’excitation sélectionne la lumière incidente, le miroir dichroïque la réfléchit vers l’objet puis laisse passer la lumière émise. Un second filtre sélectionne la longueur d’onde d’émission.

Explication

En détection directe, l’anticorps reconnaissant l’antigène est directement marqué. En détection indirecte, l’anticorps primaire est non marqué et des anticorps secondaires marqués amplifient le signal.

Explication

Le pouvoir de résolution désigne la capacité à distinguer deux éléments voisins, et non l’agrandissement. Le microscope photonique utilise des photons et atteint environ $0,2\ \mu\text{m}$, tandis que le microscope électronique utilise des électrons et atteint environ $0,2\ \text{nm}$.

Explication

L’immunoprécipitation utilise un anticorps fixé à des billes de Sépharose pour isoler une protéine native et ses partenaires. La biotinylation de surface concerne des protéines membranaires exposées au milieu extracellulaire et permet de suivre leur devenir cellulaire.

Explication

Une culture primaire est constituée de cellules isolées directement à partir d’un organe. La peau, le foie et le tissu adipeux sont des exemples d’organes ou de tissus pouvant fournir ces cellules.

Explication

La microscopie photonique en transmission repose sur le passage de la lumière à travers une coupe suffisamment fine, généralement colorée pour améliorer la visibilité des structures. Cette coloration nécessite une fixation, contrairement au contraste de phase, qui permet d’observer des cellules vivantes en culture sans coloration.

Explication

La microscopie confocale acquiert des plans de coupe optique successifs à différents niveaux de focalisation, ce qui permet une reconstruction numérique tridimensionnelle. Elle ne fournit donc pas uniquement une image bidimensionnelle isolée du plan focal.

Explication

Le MET utilise des électrons transmis à travers une coupe fine pour révéler l’ultrastructure interne. Le MEB analyse les électrons issus d’une surface métallique et fournit une représentation tridimensionnelle de cette surface ; les sels de métaux lourds concernent le contraste en MET.

Explication

La cryofracture comprend la congélation, la fracture puis la réalisation d’une réplique métallique de la surface fracturée. Le DAPI et les anticorps marqués permettent une liaison spécifique à une cible, tandis que la GFP constitue une caractéristique propre d’une protéine chimère. La cryofracture ne repose donc pas sur une coupe colorée, et la GFP n’est pas une molécule qui se lie spécifiquement à la cible.

Explication

L’immunocytochimie repère une protéine grâce à des anticorps marqués, directement ou indirectement. L’autoradiographie met en évidence des molécules radioactives sous forme de grains d’argent et permet d’étudier leur synthèse et leur devenir. La détection directe n’emploie pas d’anticorps secondaire marqué, et l’autoradiographie ne repose pas sur des fluorochromes.

Explication

Une lignée cellulaire correspond à des cellules provenant par divisions successives d’une cellule originelle et conservant les mêmes caractères structurels et fonctionnels. Les cellules souches embryonnaires proviennent quant à elles de la masse cellulaire interne du blastocyste, et une culture primaire est directement isolée d’un organe.

Explication

Les observations précèdent la formulation de l’hypothèse, qui est ensuite confrontée à une expérience. La loi générale constitue une étape ultérieure à tester, et non le point de départ du raisonnement expérimental.

Explication

La transfection par liposomes constitue une méthode d’introduction d’acides nucléiques dans les cellules. La micro-injection introduit directement le matériel, tandis que l’électroporation utilise des impulsions électriques ; la transduction repose sur des vecteurs viraux et non sur des liposomes.

Explication

Le microscope confocal focalise un faisceau laser sur un plan défini et acquiert des coupes optiques successives. Ces plans permettent une reconstruction numérique tridimensionnelle, tandis que sa faible profondeur de champ produit une image bidimensionnelle du plan focal.