Qu'est-ce que l'extraction des acides nucléiques ?
C'est la récupération et l'isolement des acides nucléiques à partir d'un échantillon cellulaire.
Quelle cellule ne contient pas d'ADN lors de l'extraction ?
Les globules rouges ne contiennent pas d'ADN.
Quelle est la première étape de l'extraction des acides nucléiques ?
La lyse des protéines est la première étape.
Comment l'ADN ou l'ARN est-il fixé lors de l'extraction ?
Ils sont fixés sur un support chargé positivement.
Comment se fait l'élution des acides nucléiques ?
Par modification du pH ou de la charge ionique.
Quelle différence de stabilité existe entre l'ADN et l'ARN ?
L'ADN est très stable, l'ARN est facilement dégradé.
Pourquoi l'ARN nécessite-t-il des précautions supplémentaires lors de son extraction ?
Parce qu'il est dégradé par les ribonucléases présentes sur la peau.
Que sont les nucléases ?
Ce sont des hydrolases qui hydrolysent la liaison phosphoester des acides nucléiques.
Quelle est la différence entre DNases et RNases ?
Les DNases hydrolysent l’ADN, les RNases hydrolysent l’ARN.
Comment distinguer exonucléases et endonucléases ?
Les exonucléases coupent aux extrémités, les endonucléases à l’intérieur.
Quelle extrémité ciblent les 5’-exonucléases ?
Elles ciblent l’extrémité 5’ phosphate.
Quelle extrémité ciblent les 3’-exonucléases ?
Elles ciblent l’extrémité 3’ hydroxyle.
Que libèrent les exonucléases à chaque coupure ?
Elles libèrent un nucléotide monophosphate.
Que sont les enzymes de restriction ?
Ce sont des endonucléases spécifiques produites naturellement par les bactéries.
Quelle séquence une enzyme de restriction reconnaît-elle ?
Une séquence précise de 4 à 6 paires de bases souvent palindromique.
Que fait une enzyme de restriction si la séquence correspond exactement ?
Elle hydrolyse une liaison phosphoester sur chacun des deux brins.
Quelles extrémités produit une digestion par enzyme de restriction avec un brin dépassant ?
Des extrémités cohésives pouvant s’apparier par complémentarité.
Quelles extrémités produit une digestion par enzyme de restriction sans complémentarité terminale ?
Des extrémités franches.
Que signifient les premières lettres dans la nomenclature d’une enzyme de restriction ?
Elles indiquent le genre et l’espèce bactérienne.
Que signifie la lettre suivante dans la nomenclature d’une enzyme de restriction ?
Elle indique la souche bactérienne.
Que signifie le chiffre romain dans la nomenclature d’une enzyme de restriction ?
Il indique l’ordre de découverte de l’enzyme.
Qu'est-ce qu'une sonde en biologie moléculaire ?
Une petite séquence d’ADN complémentaire et antiparallèle à la cible.
Quelles étapes comprend la détection par sonde ?
Dénaturation, hybridation spécifique, et détection du marquage.
Comment les sondes sont-elles marquées pour la détection ?
Par un isotope radioactif ou un fluorophore.
Qu'est-ce qu'une ADN polymérase ?
Une enzyme qui synthétise un brin d’ADN complémentaire à partir d’une amorce.
Quelle matrice utilisent les ADN polymérases ADN-dépendantes ?
Elles utilisent une matrice d’ADN.
Quelle matrice utilisent les ADN polymérases ARN-dépendantes ?
Elles utilisent une matrice d’ARN.
Quels éléments sont nécessaires à la synthèse in vitro de l’ADN ?
Une matrice simple brin, une amorce, des dNTP et une ADN polymérase.
Dans quel sens les ADN polymérases synthétisent-elles l’acide nucléique ?
Dans le sens 5’ vers 3’.
Où les ADN polymérases ajoutent-elles les nucléotides lors de la synthèse ?
À l’extrémité 3’ de l’amorce ou du brin en formation.
Qu'est-ce que la PCR en biologie moléculaire ?
Une réaction de polymérisation en chaîne qui amplifie une séquence d’ADN.
Quels sont les trois temps d'un cycle de PCR ?
Dénaturation, hybridation des amorces, et élongation.
À quelle température se déroule la dénaturation lors d'un cycle de PCR ?
À 94 °C.
Comment évolue la quantité d'ADN après n cycles de PCR ?
Elle est multipliée par .
Quelle enzyme est utilisée en PCR pour résister aux hautes températures ?
La Taq polymérase.
Chez quel organisme la Taq polymérase a-t-elle été isolée ?
Thermus aquaticus.
Quelle propriété permet à la Taq polymérase de supporter la PCR ?
Sa thermorésistance.
Qui a initialement isolé la Taq polymérase utilisée en PCR ?
Kary Mullis.
Qu'est-ce que l'électrophorèse des acides nucléiques ?
Une séparation selon leur longueur par migration dans un champ électrique continu.
Où sont déposés les acides nucléiques chargés négativement en électrophorèse ?
Près de la cathode négative.
Vers quelle électrode migrent les acides nucléiques chargés négativement ?
Vers l'anode positive.
Comment migrent les fragments courts d'acides nucléiques par rapport aux longs ?
Ils migrent plus loin et plus rapidement.
À quoi sert un marqueur de taille en électrophorèse des acides nucléiques ?
À comparer les bandes à des références de taille connue.
Comment observe-t-on les bandes d'acides nucléiques après électrophorèse ?
Après coloration sous lumière UV.
Qu'est-ce que la PCR-RFLP détecte ?
Un polymorphisme de longueur de fragments de restriction.
Quelles étapes comprend une PCR-RFLP ?
Extraction d'ADN, amplification PCR, digestion enzymatique, électrophorèse.
Que se passe-t-il si l'enzyme de restriction découpe l'amplicon ?
Plusieurs fragments plus courts sont observés.
Que montre l'absence de digestion enzymatique sur un amplicon ?
Un fragment de la longueur initiale reste intact.
Quel profil PCR-RFLP correspond au génotype homozygote normal dans la drépanocytose ?
Des bandes à 168 pb et 93 pb.
Quel profil PCR-RFLP correspond au génotype homozygote muté dans la drépanocytose ?
Une bande unique à 261 pb.
Quel profil PCR-RFLP correspond au génotype hétérozygote dans la drépanocytose ?
Les trois bandes à 261 pb, 168 pb et 93 pb.
Qu'est-ce que la RT-PCR étudie ?
L'expression d'un gène.
Que convertit la RT-PCR avant l'amplification ?
L'ARNm en ADN complémentaire.
Quels éléments sont nécessaires à la rétrotranscription de l'ARNm ?
Une matrice ARN, une amorce, des dNTP et une rétrotranscriptase.
Comment estime-t-on la concentration initiale en ARNm en PCR quantitative ?
Par le nombre de cycles pour atteindre un seuil de fluorescence appelé Ct.
Quelle relation existe-t-il entre Ct et concentration initiale en ARNm ?
Le Ct est inversement proportionnel au logarithme de la concentration initiale.
Que signifie un Ct plus faible en PCR quantitative ?
Une concentration initiale en ARNm plus élevée.
Que signifie une différence d’un cycle de Ct entre deux échantillons ?
La quantité initiale d’ARNm est deux fois plus faible dans l’échantillon avec le Ct le plus élevé.
Qu'est-ce que la PCR digitale quantifie absolument ?
Les copies d’un gène.
Comment la PCR digitale compartimente-t-elle l'échantillon ?
Dans des milliers de gouttelettes ou de puits.
Que compte-t-on en PCR digitale pour la quantification ?
Les compartiments fluorescents.
Quelles sont les étapes de la PCR digitale ?
Compartimentalisation, PCR dans chaque compartiment, comptage des positifs.
Sur quelle loi se base le calcul en PCR digitale ?
La loi de Poisson.
Que peut contenir une gouttelette de PCR digitale ?
Aucune, une ou plusieurs copies d’acide nucléique.
À quoi s'hybrident les sondes TaqMan ?
À l’ADN simple brin spécifiquement.
Quand les sondes TaqMan produisent-elles une fluorescence ?
Lors de l’élongation si le gène cible est présent.
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1. Que désigne la PCR dans le contexte de l’amplification moléculaire ?
2. Quel est le principe de séparation des acides nucléiques lors d’une électrophorèse ?
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