QCM : Techniques d’études de biologie cellulaire (32 questions)

Explication

Le pouvoir de résolution est la plus petite distance permettant d’observer deux points séparément. Une distance résolue plus faible indique une meilleure résolution. Une grande distance minimale correspond au contraire à une résolution moins performante, tandis que l’intensité lumineuse et le grossissement ne définissent pas cette distance.

Explication

Le pouvoir de résolution dépend de l’indice de réfraction, de la longueur d’onde du faisceau et de l’angle du cône lumineux entrant dans l’objectif. La température ambiante et la couleur du colorant ne font pas partie des paramètres définis pour ce pouvoir de résolution.

Explication

Les techniques morphologiques décrivent la forme et l’organisation des cellules et des tissus. Les techniques d’étude in situ servent à localiser leurs constituants biochimiques. Attribuer la localisation biochimique aux techniques morphologiques ou la description de la forme aux techniques in situ inverse ces deux finalités.

Explication

Les cellules vivantes peuvent être cultivées dans des boîtes de Petri ou des tubes, à environ 37 °C. Elles nécessitent un milieu adapté avec des nutriments ou facteurs de croissance et une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO2. La concentration indiquée n’est pas de 10 %.

Explication

La congélation rapide utilise l’azote liquide à -196 °C et des cryoprotecteurs. L’échantillon est ensuite coupé au cryostat à -20 ou -30 °C, puis fixé et coloré. Le microtome après inclusion en paraffine correspond à la préparation classique et non à cette séquence de congélation rapide.

Explication

La préparation classique associe une fixation aux aldéhydes, une déshydratation, une inclusion en paraffine ou en résine, puis un refroidissement et une coupe au microtome ou à l’ultramicrotome. La congélation dans l’azote liquide appartient à la congélation rapide et ne constitue pas l’étape initiale de cette préparation classique.

Explication

Les coupes destinées au microscope optique ont généralement une épaisseur d’environ 5 μm, tandis que celles destinées au MET mesurent environ 50 nm. La coupe optique est donc plus épaisse. Les valeurs de 5 μm pour le MET et de 50 nm pour le microscope optique sont inversées.

Explication

Le microscope optique standard utilise des photons qui traversent successivement le condenseur, l’objectif puis l’oculaire. Le condenseur précède donc l’objectif dans le trajet lumineux. Les électrons caractérisent le microscope électronique, et l’oculaire intervient après le condenseur.

Explication

L’observation optique standard nécessite une coupe fine, presque transparente, laissant passer la lumière. Des colorations comme l’éosine ou l’hémalun augmentent le contraste. La coloration ne remplace pas la finesse requise de la coupe ; elle complète cette condition.

Explication

Le microscope optique standard permet d’observer la forme et l’aspect des cellules ainsi que des noyaux, ce qui convient à une appréciation morphologique globale. Il ne permet toutefois pas d’observer la plupart des structures infracellulaires. Cette limite ne supprime pas l’observation des noyaux.

Explication

Le contraste de phase permet d’observer des cellules vivantes sans coupe, fixation ni coloration, notamment pendant leurs mouvements et leur division. La fixation, la coloration et la coupe ultrafine ne sont pas requises pour cette technique.

Explication

Un fluorochrome absorbe une longueur d’onde λ1 puis émet une lumière de longueur d’onde supérieure λ2. Les différences de phase, les électrons et les molécules non fluorescentes relèvent d’autres principes que la détection par fluorescence.

Explication

La fluorescéine absorbe dans le bleu et émet dans le jaune-vert. La rhodamine absorbe dans le vert et émet dans le rouge ; un fluorochrome fluorescent émet une lumière de longueur d’onde supérieure à celle qu’il absorbe. Les autres associations spectrales sont incorrectes.

Explication

Le MEB analyse la surface d’un échantillon entier métallisé avec un faisceau d’électrons et fournit une image en relief. La coupe ultrafine et l’observation des structures internes caractérisent plutôt le MET, tandis que le faisceau lumineux relève de la microscopie optique.

Explication

Le MET fonctionne sous une tension comprise entre 40 et 100 kV et peut atteindre des grossissements de 30 000, 50 000 ou 100 000 fois. Les grossissements de 300 à 1 000 fois et de 3 000, 5 000 ou 10 000 fois ne correspondent pas aux performances indiquées pour le MET.

Explication

L’immunohistologie localise des molécules antigéniques, principalement des protéines et des glycoprotéines, grâce à l’interaction spécifique antigène-anticorps. Les séquences d’acides nucléiques et les sondes complémentaires relèvent de l’hybridation in situ.

Explication

Dans le marquage direct, le marqueur est associé à l’anticorps qui reconnaît l’antigène. Le marquage indirect ajoute un anticorps secondaire marqué reconnaissant l’anticorps primaire, ce qui amplifie le signal ; la sonde nucléique appartient à l’hybridation in situ.

Explication

L’hybridation in situ localise une séquence d’acide nucléique au moyen d’une sonde simple brin marquée et complémentaire. Les anticorps caractérisent l’immunohistologie, tandis que le précurseur radioactif et l’exposition photographique relèvent de l’autoradiographie.

Explication

L’autoradiographie suit dans le temps des macromolécules après incubation avec un précurseur radioactif, exposition à une émulsion photographique et révélation de grains d’argent noirs. La sonde complémentaire correspond à l’hybridation in situ, tandis que l’anticorps secondaire marqué appartient au marquage indirect.

Explication

La cytométrie de flux analyse rapidement des cellules marquées par des anticorps fluorescents, les différencie, les compte et peut les trier. Elle mesure une fluorescence cellulaire, mais ne montre pas directement la localisation du signal comme le ferait la microscopie.

Explication

La cytométrie de flux est utilisée pour le typage des leucémies, la numération des sous-populations lymphocytaires et la détection d’aneuploïdies. Elle mesure une fluorescence cellulaire et ne localise pas directement le signal comme la microscopie.

Explication

La centrifugation différentielle repose sur des centrifugations successives, en conservant le surnageant pour les étapes suivantes. Le surnageant peut donc être recentrifugé, tandis que le culot est récupéré à chaque étape. Les petits organites nécessitent généralement une vitesse et un temps plus élevés.

Explication

Une centrifugation de 20 minutes à 20 000 g sédimente les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes. À 1 000 g, les noyaux et débris sédimentent, tandis que les microsomes apparaissent après une centrifugation plus forte et plus longue.

Explication

La production d’anticorps monoclonaux commence par l’immunisation d’une souris, puis la récupération de ses lymphocytes B. Ceux-ci sont fusionnés avec des cellules de myélome, les clones producteurs sont sélectionnés puis amplifiés; les cellules épithéliales ne participent pas à cette fusion.

Explication

L’ELISA indirect est utilisé pour doser ou rechercher un anticorps dans l’échantillon, tandis que l’ELISA sandwich dose ou recherche un antigène. Cet antigène est capturé entre des anticorps, et le format sandwich ne dose donc pas un anticorps libre échantillonnaire.

Explication

Dans l’ELISA, l’intensité du signal dépend de la quantité d’antigène ou d’anticorps présente. Une enzyme liée à un anticorps secondaire peut produire la coloration, qui est mesurée au spectrophotomètre. Le signal ne provient pas d’une enzyme ajoutée librement, et son évaluation ne repose pas sur la microscopie électronique.

Explication

La chromatographie sépare et purifie les constituants d’un mélange grâce à une phase mobile et une phase fixe. Les molécules migrent à des vitesses différentes. Une séparation dans un gel parcouru par un courant relève de l’électrophorèse, et la chromatographie ne repose pas sur deux phases fixes.

Explication

La chromatographie d’exclusion sépare les protéines selon leur taille. La chromatographie d’affinité repose au contraire sur une interaction spécifique avec un ligand, comme un anticorps, et non sur la masse ou la charge.

Explication

En électrophorèse, les protéines sont chauffées avec du SDS et un agent réducteur, puis déposées dans un gel de polyacrylamide. Le courant les sépare selon leur poids moléculaire; la membrane de nitrocellulose intervient ensuite dans le Western Blot.

Explication

L’extraction, la purification, la détermination des séquences, la PCR et la RT-PCR relèvent de la biologie moléculaire. La PCR amplifie une séquence, tandis que la RT-PCR commence par l’étude d’un ARN rétrotranscrit ; les formulations inversant ces mécanismes sont donc fausses.

Explication

La radioactivité permet de détecter et de suivre le devenir de molécules d’ADN ou de protéines. Le tri de cellules selon leur fluorescence relève de la cytométrie, la recherche de séquences des outils informatiques et l’amplification de la PCR ; la séparation selon la masse n’est pas la fonction indiquée.

Explication

Le MEB balaie la surface d’un échantillon entier métallisé et fournit une image en relief de ses structures superficielles. L’observation de l’intérieur d’une coupe ultrafine avec un faisceau traversant l’échantillon correspond au MET.