L’histochimie
Explication
L’histochimie repose sur des réactions chimiques qui colorent les molécules afin de les localiser dans les cellules ou les tissus. L’histoenzymologie se distingue par l’utilisation de l’activité enzymatique et non par une simple réaction chimique de coloration.
Marquage fluorescent, excitation laser, passage individuel puis tri des gouttelettes
Explication
Les cellules en suspension sont marquées par des anticorps fluorescents, excitées par un laser et analysées individuellement avant le tri des gouttelettes selon leur fluorescence. La microscopie, elle, localise directement un signal dans une cellule ou un tissu sans réaliser ce tri par gouttelettes.
Il utilise un anticorps primaire suivi de plusieurs anticorps secondaires marqués
Explication
Le marquage indirect associe un anticorps primaire à plusieurs anticorps secondaires marqués, ce qui amplifie le signal. Le marquage direct repose au contraire sur un anticorps directement couplé à un marqueur.
Des photons
Explication
Le microscope optique standard forme l’image avec des photons qui traversent successivement le condenseur, l’objectif et l’oculaire. Les électrons sont associés au fonctionnement des microscopes électroniques, et non à celui du microscope optique standard.
L’indice de réfraction, la longueur d’onde et le demi-angle du cône lumineux entrant
Explication
Le pouvoir de résolution dépend de l’indice de réfraction du milieu, de la longueur d’onde et de la moitié de l’angle du cône lumineux entrant dans l’objectif. La température et la durée d’observation ne constituent pas les paramètres optiques indiqués ici.
Un fluorochrome émet une lumière de longueur d’onde supérieure à celle qu’il absorbe
Explication
La fluorescence repose sur l’absorption d’une lumière par un fluorochrome, suivie de l’émission d’une lumière de longueur d’onde plus grande. La déviation de la lumière relève du contraste de phase, tandis que les électrons caractérisent les microscopes électroniques.
La fluorescéine absorbe le bleu et émet dans le jaune-vert
Explication
La fluorescéine absorbe dans le bleu puis émet dans le jaune-vert. La rhodamine présente une autre combinaison spectrale : elle absorbe dans le vert et émet dans le rouge.
Des noyaux et des débris cellulaires
Explication
Une centrifugation de 10 minutes à 1000 g sédimente principalement les noyaux et les débris cellulaires. Les mitochondries, les lysosomes et les péroxysomes nécessitent ensuite une centrifugation du surnageant à une force plus élevée.
Un anticorps reconnu par un antigène fixé au fond d’un puits
Explication
Dans l’ELISA indirect, l’anticorps à doser reconnaît un antigène fixé au puits, puis un anticorps secondaire enzymatique permet la révélation colorée. Le dosage d’un antigène capturé entre deux anticorps correspond à l’ELISA sandwich.
Une coupe ultrafine placée dans un vide poussé
Explication
Dans un MET, les électrons traversent une coupe ultrafine maintenue dans un vide poussé, puis des lentilles électromagnétiques les focalisent. Le balayage d’une surface métallisée correspond au MEB, tandis que les fluorochromes relèvent de la microscopie optique.
Augmenter progressivement la vitesse et la durée sur l’homogénat et les surnageants
Explication
La centrifugation différentielle applique successivement des centrifugations plus rapides et plus longues à l’homogénat puis aux surnageants. Le fractionnement dépend ainsi de la sédimentation progressive des constituants, et non de leur fluorescence ou de leur charge.
$$\times 400$$
Explication
Le grossissement total s’obtient en multipliant le grossissement de l’objectif par celui de l’oculaire : . La capacité à distinguer deux détails relève du pouvoir de résolution et ne se calcule pas par cette multiplication.
La forme générale d’une cellule et l’aspect de son noyau
Explication
Le microscope optique standard permet d’observer la forme et l’aspect des cellules ainsi que des noyaux. Il ne permet pas d’étudier correctement les structures infracellulaires fines, qui exigent des techniques à résolution supérieure.
La chromatographie d’affinité, fondée sur la liaison spécifique au ligand fixé
Explication
La chromatographie d’affinité retient une protéine grâce à la reconnaissance spécifique d’un ligand fixé à la colonne. La chromatographie d’exclusion repose plutôt sur la taille moléculaire et des billes poreuses, tandis que l’électrophorèse utilise un champ électrique.
PAS — résidus glucidiques
Explication
La réaction PAS met en évidence des résidus glucidiques, tandis que Feulgen-Rossenbeck révèle l’ADN des noyaux. Associer PAS à l’ADN inverse les propriétés respectives des deux réactions.
Sang, liquide céphalo-rachidien, urines et lavage broncho-alvéolaire
Explication
Le sang, le liquide céphalo-rachidien, les urines et le lavage broncho-alvéolaire font partie des échantillons cellulaires cités. Les autres ensembles regroupent des réactifs, des composants du microscope ou du matériel de préparation.
Incuber la coupe avec le substrat puis révéler le produit coloré
Explication
L’histoenzymologie met la coupe en présence du substrat de l’enzyme, puis révèle le produit coloré formé par la réaction. Une sonde nucléique ou une réaction ciblant les glucides relève d’autres méthodes de localisation.
Par biopsie ou par résection lors d’un prélèvement diagnostique ou d’une intervention
Explication
Les échantillons tissulaires sont principalement obtenus par biopsie ou résection, dans un contexte diagnostique ou opératoire. L’étalement d’une goutte de sang produit une préparation cellulaire plutôt qu’un fragment tissulaire.
Différencier, compter et trier des cellules marquées
Explication
La cytométrie de flux analyse des cellules marquées, puis permet de les différencier, de les compter et de les trier. L’observation spatiale dans une coupe relève plutôt de la microscopie, tandis que la centrifugation sépare des constituants cellulaires.
Il réalise des coupes optiques successives au laser avant de les reconstruire
Explication
Le confocal utilise un laser pour obtenir des coupes optiques successives, qui sont ensuite assemblées en une image tridimensionnelle. Les coupes mécaniques et les métaux lourds relèvent du MET, alors que le balayage électronique caractérise le MEB.
Fixation, déshydratation, inclusion, refroidissement et durcissement, puis coupe
Explication
La préparation chimique commence par une fixation, suivie d’une déshydratation, d’une inclusion, d’un refroidissement et d’un durcissement avant la coupe. La congélation et la coupe au cryostat décrivent plutôt la préparation rapide.
Il balaie la surface métallisée et détecte les électrons renvoyés
Explication
Le MEB dirige un faisceau d’électrons sur la surface métallisée et recueille les électrons renvoyés afin de former une image en relief. Le passage des électrons à travers une coupe est le principe du MET, tandis que les deux autres mécanismes appartiennent à la microscopie optique.
Une protéine de faible poids moléculaire
Explication
Dans le gel de polyacrylamide, les petites protéines se déplacent plus facilement et migrent donc plus vite et plus loin que les protéines de poids moléculaire élevé. Une protéine volumineuse progresse moins rapidement dans la matrice du gel.
Les constituants migrent à des vitesses différentes entre une phase mobile et une phase fixe
Explication
La chromatographie exploite les interactions différentielles des molécules avec une phase mobile et une phase fixe, ce qui modifie leur vitesse de migration. La séparation dans un gel sous champ électrique correspond à l’électrophorèse, et non à la chromatographie.
Elle dépend de la quantité initiale d’antigène ou d’anticorps et se compare à une gamme étalon
Explication
Dans un ELISA, l’intensité colorée mesurée au spectrophotomètre est liée à la quantité initiale de la cible et peut être quantifiée grâce à une gamme étalon. La fluorescence cellulaire et la sédimentation correspondent à d’autres méthodes analytiques.
Décrire la morphologie des cellules et étudier leurs constituants biochimiques in situ
Explication
L’imagerie cellulaire associe la description morphologique des cellules et des tissus à l’étude in situ de leurs constituants biochimiques. La mesure des conditions de culture concerne la biologie cellulaire expérimentale, pas la définition de l’imagerie cellulaire.
Un échantillon fixé, inclus en résine, coupé à environ 50 nm et contrasté par des métaux lourds
Explication
La préparation du MET comprend la fixation, l’inclusion en résine, une coupe d’environ 50 nm, le dépôt sur une grille et le contraste par des métaux lourds. Un échantillon non coupé et recouvert d’or correspond plutôt au MEB.
Déposer une goutte de sang ou de suspension sur une lame, puis l’étaler ou la laisser sécher
Explication
L’étalement cellulaire consiste à déposer une goutte de sang ou une suspension sur une lame, puis à l’étaler ou à la laisser sécher pour former une couche observable. L’inclusion en résine et la coupe concernent une préparation tissulaire chimique.
Il observe des cellules vivantes sans coupe, fixation ni coloration
Explication
Le contraste de phase permet d’examiner des cellules vivantes sans préparation lourde, ce qui rend possible le suivi de leurs mouvements et de leur division. La métallisation et les métaux lourds concernent les préparations en microscopie électronique, pas ce microscope optique.
Immuniser une souris, fusionner ses lymphocytes B avec des cellules de myélome, sélectionner et amplifier les clones
Explication
La production d’anticorps monoclonaux associe l’immunisation d’une souris, la récupération des lymphocytes B, leur fusion avec des cellules de myélome, puis la sélection et l’amplification des clones producteurs. Les autres séquences ne décrivent pas la création de clones hybrides producteurs d’un anticorps homogène.
Une tension de 40 à 100 kV, une résolution de 0,1 à 0,2 nm et un grossissement jusqu’à 100 000 fois
Explication
Le MET fonctionne entre 40 et 100 kV, atteint une résolution de 0,1 à 0,2 nm et peut atteindre un grossissement de 100 000 fois. Les autres combinaisons mélangent notamment les paramètres du MEB ou dégradent les performances attribuées au MET.
Il fournit une série de plans selon l’axe Z pour préciser sa position
Explication
Le confocal permet d’examiner des échantillons plus épais et d’obtenir plusieurs plans selon l’axe Z, ce qui améliore la localisation de la molécule dans la cellule ou sur la membrane plasmique. Une image globale sans distinction de profondeur correspond davantage aux limites de la fluorescence classique.
Environ $$0{,}2\ \text{mm}$$
Explication
Le pouvoir de résolution de l’œil humain est d’environ . Une valeur exprimée en micromètres ou en nanomètres correspondrait à une capacité de distinction bien plus fine que celle de l’œil humain.
Il est capturé par un anticorps fixé au puits puis reconnu par un second anticorps enzymatique
Explication
L’ELISA sandwich immobilise d’abord un anticorps de capture, puis l’antigène est reconnu par un second anticorps couplé à une enzyme. L’ELISA indirect repose plutôt sur la détection d’un anticorps par un antigène fixé.
Chauffage avec SDS et agent réducteur, dépôt dans un gel, migration électrique, puis révélation
Explication
Les protéines sont d’abord dénaturées par chauffage en présence de SDS et d’un agent réducteur, puis déposées dans un gel de polyacrylamide et séparées par un courant avant leur révélation. L’élution acide et les billes poreuses relèvent de la chromatographie, tandis que le transfert sur membrane intervient dans le Western Blot.
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Qu'est-ce que le pouvoir de résolution en microscopie ?
La plus petite distance observable entre deux points sans qu’ils soient confondus.
Que signifie une valeur D plus petite du pouvoir de résolution ?
Le microscope est plus puissant.
Que regroupe l’imagerie cellulaire ?
La description morphologique des cellules et tissus et l’étude in situ de leurs constituants biochimiques.
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