Fiche de révision : Introduction à l’histologie

📋 Plan du Cours

1. Concept et organisation des tissus
2. Préparation histologique et microscopie
3. Interprétation des images histologiques
4. Colorations histologiques spéciales
5. Détection des activités enzymatiques
6. Immunohistochimie et révélation
7. Hybridation in situ

📖 1. Concept et organisation des tissus

🔑 Notions clés & Définitions

• Histologie : Science qui étudie l’organisation des tissus et détecte et localise in situ les constituants moléculaires de l’organisme.
• Tissu : Ensemble de cellules différenciées formant une association territoriale, fonctionnelle et biologique.

★ À maîtriser

• L’histologie permet de visualiser les molécules dans les tissus, les cellules, leurs organites ou la matrice extracellulaire, et d’en déterminer l’emplacement et la configuration.

• Les quatre types de tissus sont :

  • les épithéliums de revêtement et glandulaires
  • les tissus conjonctifs banals et ostéoarticulaires
  • les tissus musculaires squelettiques, cardiaques et lisses
  • les tissus nerveux centraux et périphériques

Compléments

📌 L’anatomie décrit macroscopiquement les systèmes, appareils et organes individualisés, tandis que l’histologie étudie l’organisation des tissus et leurs constituants moléculaires.

• L’estomac comprend des épithéliums, des tissus conjonctifs, des tissus musculaires, des tissus nerveux et des cellules libres.

📖 2. Préparation histologique et microscopie

★ À maîtriser

• 🔄 La démarche histologique générale comprend : préparer les échantillons pour rendre visibles les structures ou phénomènes, observer ces structures ou phénomènes au microscope sous forme d’images, interpréter les images

• 🔄 L’histologie standard en microscopie optique suit neuf étapes :
  1. prélèvement
  2. fixation au formol à raison de dix fois le volume du prélèvement
  3. déshydratation par alcools de températures croissantes puis xylène
  4. inclusion dans la paraffine chauffée à 56 °C
  5. coupe au microtome de 2 à 5 microns
  6. réhydratation par alcools de températures décroissantes puis eau distillée
  7. coloration
  8. déshydratation
  9. montage

Compléments

• 🔄 L’étude de tissus congelés suit les étapes suivantes : prélèvement avec congélation rapide, congélation à −80 °C avec un cryoprotecteur, notamment l’isopentane+++, coupe au cryostat de 5 à 50 micromètres, fixation, coloration, montage

• 🔄 La cytologie sur cellules étalées suit : étalement sur lame par frottis, apposition ou pastille de centrifugation, fixation par séchage à l’air ou à l’alcool méthylique ou éthylique, coloration standard par MGG ou Papanicolaou, montage

• 🔄 La préparation pour microscopie électronique à transmission comprend : fixation au glutaraldéhyde tamponné puis post-fixation au tétroxyde d’osmium (OsO4), inclusion en résine Epon ou Araldite, coupe à l’ultramicrotome de 80 nm, contraste par acétate d’uranyle ou sels de plomb, comme le citrate de plomb

💡 Astuce mémo

Prélèvement → préparation → observation → interprétation

📖 3. Interprétation des images histologiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Artefact : Image artificielle créée par la technique, notamment lors du prélèvement ou de la fixation, qui déforme l’image et peut être liée à une préservation défectueuse des tissus.

★ À maîtriser

• La microscopie optique permet d’observer des objets entre le millimètre et le micromètre, tandis que la microscopie électronique permet d’observer des objets entre le millimètre et le nanomètre, voire l’ångström (10⁻¹⁰).

• Une image histologique est une représentation en deux dimensions qui ne passe pas nécessairement par la zone d’intérêt.

Compléments

• L’incidence de coupe peut modifier le rendu histologique d’un objet.

💡 Astuce mémo

Optique : mm–μm ; électronique : mm–nm

📖 4. Colorations histologiques spéciales

★ À maîtriser

• La coloration PAS oxyde les glucides en résidus acétones, puis les révèle avec la base de Schiff en pourpre ; après traitement du tissu par la diastase, qui lyse les résidus glucidiques, la coloration s’atténue, alors qu’elle est violette et très brillante sans diastase.

• La coloration Oil Red révèle les lipides neutres et s’utilise uniquement sur des tissus congelés ou des cellules fraîches afin de conserver les lipides présents.

• La coloration de Perls, ou bleu de Prusse, révèle les ions Fe3+ et détecte le fer dans les cellules ou les tissus.

Compléments

• Dans une préparation colorée par Perls, les macrophages observés contiennent des particules de fer.

📖 5. Détection des activités enzymatiques

★ À maîtriser

• L’histoenzymologie révèle une activité enzymatique en utilisant un substrat spécifique qui produit une substance colorée ou réagit avec un chromogène pour former une couleur, dont l’intensité est proportionnelle à l’activité enzymatique.

📌 L’histoenzymologie nécessite de préserver l’activité enzymatique dans le tissu, car la fixation inactive la réaction et empêche l’application de la technique sur des coupes incluses en paraffine.

Compléments

• Dans le muscle squelettique, l’histoenzymologie évalue l’activité ATPase et les activités oxydatives myocytaires.

• L’évaluation de l’activité ATPase et des activités oxydatives myocytaires permet aussi d’évaluer l’activité phosphatase acide des lysosomes et de visualiser les macrophages.

💡 Astuce mémo

Substrat enzymatique → produit coloré révélant l’activité

📖 6. Immunohistochimie et révélation

🔑 Notions clés & Définitions

• Fluorochrome : Molécule qui émet une fluorescence lorsqu’elle est exposée à une lumière de longueur d’onde donnée.

★ À maîtriser

• L’immunohistochimie révèle un antigène avec un anticorps spécifique anti-X, qui se fixe à l’antigène et permet de détecter le complexe immun anticorps-antigène.

📌 L’immunofluorescence utilise un anticorps anti-X couplé à un fluorochrome et un microscope à fluorescence ; elle se réalise sur tissu frais ou congelé, fournit des marquages très fins, mais sa révélation s’évanouit en quelques semaines.

📌 En immunohistochimie enzymatique, l’anticorps est conjugué à une enzyme qui réagit avec un substrat chromogène pour produire une coloration.

Compléments

• L’immunofluorescence permet des doubles ou triples marquages en utilisant plusieurs anticorps couplés à des fluorochromes.

• La peroxydase de raifort (HRP) utilise la diaminobenzidine (DAB) comme substrat chromogène et produit une coloration brune.

• La phosphatase alcaline (PA) utilise le Fast-Red comme substrat chromogène et produit une coloration rouge.

• Dans une méthode indirecte, un anticorps primaire non marqué spécifique de l’antigène est révélé par un anticorps secondaire conjugué anti-anticorps de souris ; cette méthode est économique et donne de meilleurs résultats.

📌 En immuno-électronique, l’immunoperoxydase associe un anticorps au DAB, dont le produit brun est dense aux électrons, tandis que l’Immunogold associe un anticorps à de l’or colloïdal dont les billes de taille définie sont denses aux électrons.

📌 Le pré-embedding réalise l’immunochimie sur tissu frais, tandis que le post-embedding la réalise sur du matériel fixé.

💡 Astuce mémo

Immunofluorescence : marquage fin mais évanescent ; immuno-enzymatique : coloration durable

📖 7. Hybridation in situ

🔑 Notions clés & Définitions

• Hybridation in situ : Recherche des acides nucléiques au moyen d’une sonde spécifique et complémentaire, marquée pour révéler la présence d’ADN ou d’ARN.

📝 Points essentiels

📌 Les sondes marquées par isotopes radioactifs produisent des images précises et fines, mais sont dangereuses, tandis que les sondes froides à la biotine sont très utilisées et leur révélation est chromogénique.

💡 Astuce mémo

Isotopes : précis mais dangereux ; biotine : révélation chromogénique

📊 Tableaux de synthèse

Préparations microscopiques

Méthodes de révélation