Fiche de révision : Techniques de dosage des médicaments

📋 Plan du Cours

1. Analyseurs automatisés et organisation technique
2. Immunoanalyses homogènes
3. Immunoanalyses hétérogènes
4. Dosages non immunologiques automatisés
5. Principes de chromatographie
6. Dosage par chromatographie gazeuse
7. Dosage par chromatographie liquide
8. Contrôle qualité des dosages
9. Erreurs pré-analytiques

📖 1. Analyseurs automatisés et organisation technique

🔑 Notions clés & Définitions

• Module photométrique : mesure la densité optique à travers la cuvette réactionnelle au moyen d’un photomètre fixe réalisant une mesure bichromatique à deux longueurs d’onde

★ À maîtriser

• Les analyseurs automatisés de biochimie et d’immunologie sont multiparamétriques, à accès aléatoire, et adaptés aux analyses de routine comme aux urgences.

Compléments

• Le Dimension Vista® regroupe notamment la colorimétrie, la potentiométrie, les immunodosages homogènes et hétérogènes ainsi que la néphélométrie.

• La cadence du Dimension Vista® atteint environ 1500 tests par heure.

• Le Pentra 400 comporte:

  • un plateau échantillon
  • un plateau réactifs
  • un plateau réactionnel
  • un chargeur-déchargeur de cuvettes
  • des bras échantillon et réactifs
  • un mélangeur
  • un module ISE
  • un logiciel

💡 Astuce mémo

Échantillon → réactifs → réaction → lecture

📖 2. Immunoanalyses homogènes

🔑 Notions clés & Définitions

• EMIT : Schneider, R. S. et al., Homogeneous enzyme immunoassay for opiates in urine, 1973 — un immunodosage enzymatique homogène dans lequel la présence du médicament modifie l’inhibition de l’activité enzymatique liée à l’anticorps

★ À maîtriser

• Les immunodosages homogènes comprennent notamment l’EMIT, le CEDIA et le FPIA, tandis que les immunodosages hétérogènes comprennent notamment l’ACMIA, la MEIA, la CMIA et l’ECLIA.

Compléments

• Dans l’EMIT, l’ajout du substrat G6P et du NAD permet de mesurer à 340 nm la transformation du NAD en NADH et H+ après la réaction enzymatique.

💡 Astuce mémo

Avec médicament : activité enzymatique conservée ; sans médicament : activité inhibée

📖 3. Immunoanalyses hétérogènes

★ À maîtriser

• Dans l’ECLIA du tacrolimus, le tacrolimus marqué au ruthénium entre en compétition avec le tacrolimus de l’échantillon pour les anticorps anti-tacrolimus biotinylés, puis les complexes sont capturés par des microparticules magnétiques tapissées de streptavidine, lavés et mesurés par luminescence avec un photomultiplicateur.

Compléments

• Sur les analyseurs cobas, la chimie du tacrolimus est désignée TCL et celle de la ciclosporine CSA.

💡 Astuce mémo

Compétition → capture magnétique → lavage → luminescence

📖 4. Dosages non immunologiques automatisés

📝 Points essentiels

• Le dosage enzymatique du paracétamol sur analyseur Dimension produit du para-aminophénol, puis une réaction avec l’o-crésol et le sulfate de cuivre ammoniacal conduit à un composé absorbant à 600 nm.

• Le dosage du lithium sur analyseur Dimension repose sur une méthode complexométrique dans laquelle le complexe formé absorbe à 540 nm.

📖 5. Principes de chromatographie

🔑 Notions clés & Définitions

• Chromatographie : sépare les constituants d’un mélange après injection grâce à leur migration dans une phase mobile à travers une colonne, puis les détecte sous forme de signaux en fonction du temps

★ À maîtriser

📌 La chromatographie en phase gazeuse utilise une phase mobile gazeuse, tandis que la chromatographie liquide haute performance utilise une phase mobile liquide.

Compléments

• Les détecteurs cités comprennent le FID et la spectrométrie de masse pour la CPG, ainsi que le DAD, la spectrométrie de masse et la spectrométrie de masse tandem pour la CLHP.

💡 Astuce mémo

Injection → séparation → détection

📖 6. Dosage par chromatographie gazeuse

🔑 Notions clés & Définitions

• Détecteur FID : brûle l’éluat dans une flamme d’hydrogène et d’air, mesure le courant ionique produit par la combustion et fournit un signal dont l’aire du pic reflète la masse du composé élué

★ À maîtriser

• Pour doser le méprobamate en GC-FID, le sérum est extrait avec un tampon phosphate à pH 5,5, du dichlorométhane et du vinylbarbital comme étalon interne, puis la phase organique est centrifugée, évaporée sous azote, reprise par de l’acétate d’éthyle et injectée.

• Le méprobamate est identifié par son temps de rétention relatif et sa concentration est calculée à partir d’une gamme d’étalonnage fondée sur le rapport méprobamate sur étalon interne.

Compléments

• Dans l’exemple présenté, la concentration de méprobamate chez le patient est de 128 mg/L et le seuil toxique est supérieur à 40 mg/L.

💡 Astuce mémo

Extraction du sérum → injection GC → séparation → quantification

📖 7. Dosage par chromatographie liquide

★ À maîtriser

• 🔄 Le dosage LC-DAD/MS comprend:
  1. extraction liquide-liquide
  2. injection dans la chaîne UPLC
  3. séparation chromatographique
  4. détection par DAD et MS

• Pour l’hydroxychloroquine, le résultat est rendu avec le détecteur UV à 342 nm, tandis que le signal à 250 nm et celui du détecteur de masse sont utilisés comme confirmations.

Compléments

• L’exemple de dosage de l’hydroxychloroquine donne une concentration de 0,786 mg/L et le compte-rendu comporte les concentrations de référence, l’interprétation et les informations relatives au traitement.

📖 8. Contrôle qualité des dosages

🔑 Notions clés & Définitions

• Contrôle interne de qualité : valide la série analytique et est idéalement réalisé à trois niveaux : bas, moyen et haut

• Évaluation externe de la qualité : permet de situer rétrospectivement les résultats d’un laboratoire par rapport à ceux des autres laboratoires et de comparer les performances des techniques et des analyseurs

★ À maîtriser

📌 Pour l’accréditation COFRAC, l’EEQ est nécessaire à la validation d’une méthode.

Compléments

• Les contrôles internes de qualité sont gérés par des logiciels utilisant notamment les cartes de Levey-Jennings et les règles de Westgard.

• Lors d’un EEQ de ciclosporine, un résultat de 632 μg/L a été comparé à une moyenne de 626,7 μg/L pour les 46 laboratoires utilisant la LC-MS/MS et à une moyenne de 614,4 μg/L pour les 71 laboratoires participants.

• En juin 2008, le dosage de l’amikacine à l’HEH est passé de la méthode turbidimétrique QMS à la méthode QMS après l’abandon de la méthode EMIT.

💡 Astuce mémo

CIQ : valide la série ; EEQ : compare le laboratoire aux autres

📖 9. Erreurs pré-analytiques

📝 Points essentiels

📌 Une erreur pré-analytique peut survenir lorsque l’identité inscrite sur la demande de dosage ne correspond pas à celle figurant sur l’étiquette du tube.

📊 Tableaux de synthèse

Comparaison des méthodes chromatographiques

Contrôles de qualité