Quelle différence principale existe entre tissus intacts et culture cellulaire ?
Les tissus intacts contiennent plusieurs types cellulaires, la culture cellulaire est plus homogène.
Comment le fractionnement cellulaire libère-t-il les acides nucléiques ?
Par choc osmotique, ultrasons ou méthodes mécaniques avec broyeur.
Quelles méthodes mécaniques peuvent accompagner le fractionnement cellulaire ?
L'utilisation de chaleur et de microbilles.
Que rompt une lyse partielle dans la cellule ?
La membrane plasmique et les membranes du réticulum endoplasmique.
Que conserve une lyse partielle dans la cellule ?
Le noyau et les mitochondries.
Que provoque une lyse énergique ?
La rupture de toutes les membranes et la libération de tous les constituants cellulaires.
Qu'est-ce que l'homogénat en biologie cellulaire ?
La suspension cellulaire obtenue après lyse des cellules.
Selon quels critères l’ultracentrifugation préparative sépare-t-elle les constituants ?
Selon leur taille et leur densité.
Pourquoi plusieurs centrifugations sont-elles nécessaires en ultracentrifugation préparative ?
Pour obtenir une solution plus purifiée.
Quelles différences structurales distinguent l’ADN de l’ARN ?
L’ADN est double brin et l’ARN est monobrin.
Quels sucres distingue l’ADN de l’ARN ?
L’ADN contient du désoxyribose, l’ARN du ribose.
Quelle base azotée remplace la thymine dans l’ARN ?
L’uracile remplace la thymine dans l’ARN.
Quel agent est utilisé pour déprotéiniser avant la précipitation des protéines ?
Le β-mercaptoéthanol ou le SDS.
Comment est récupéré l’ADN après extraction phénol-chloroforme ?
L’ADN est précipité par l’éthanol.
Quelle précaution est essentielle pour préserver l’ARN lors de l’extraction ?
Inhiber les RNases avec l’isothiocyanate de guanidine.
Qu'est-ce qu'une enzyme ?
Une protéine qui joue le rôle de catalyseur biologique.
Que permettent de faire les outils enzymatiques en biologie moléculaire ?
Ils permettent de couper, méthyler, phosphoryler, déphosphoryler, ligaturer ou polymériser les acides nucléiques.
Que sont les nucléases ?
Ce sont des hydrolases qui clivent les liaisons phosphodiester entre nucléotides.
Quelle est la différence entre exonucléases et endonucléases ?
Les exonucléases dégradent depuis une extrémité, les endonucléases coupent à l’intérieur.
Que libèrent les exonucléases en dégradant les acides nucléiques ?
Elles libèrent des mononucléotides.
Que produisent les endonucléases en coupant les acides nucléiques ?
Elles produisent des polynucléotides.
Quelle est la spécificité de la nucléase S1 ?
Elle coupe aléatoirement les acides nucléiques simple brin.
À quoi sert la nucléase S1 dans l’étude des gènes ?
Elle analyse les hybrides ADN/ARN pour étudier l’organisation exon-intron.
Quelle est la préférence de la DNAse I pour l’hydrolyse ?
Elle hydrolyse préférentiellement les liaisons au niveau des bases pyrimidiques.
Pourquoi utilise-t-on la DNAse I lors du travail sur l’ARN ?
Pour éliminer l’ADN présent dans l’échantillon.
Qu'est-ce qu'une enzyme de restriction ?
Une endonucléase qui coupe l'ADN double brin à un site spécifique.
Quelle différence y a-t-il entre une coupure à bout franc et à bout cohésif ?
Le bout franc a des extrémités nettes, le bout cohésif des extrémités simple brin complémentaires.
Comment appelle-t-on aussi les extrémités laissées par une coupure à bout cohésif ?
Des extrémités collantes ou protusives.
Quels types de séquences reconnaissent le plus souvent les enzymes de restriction ?
Des séquences palindromiques de 4 à 8 nucléotides.
Où sont parfois situés les sites de coupure des enzymes de restriction ?
À distance de la séquence reconnue.
En quoi consiste le clonage moléculaire ?
Insérer un fragment d'ADN dans un vecteur pour créer un ADN recombinant.
Quel type de vecteur est souvent utilisé pour le clonage moléculaire ?
Un plasmide bactérien.
Qu'ajoute une méthylase à une cytosine ou une adénine ?
Un groupement méthyle —CH3.
Quel est l'effet de la méthylation sur un site de restriction palindromique ?
Elle empêche sa coupure par l’enzyme de restriction.
Que fait une polynucléotide kinase à un polynucléotide ?
Elle ajoute un groupement phosphate.
Quelle source fournit généralement le phosphate ajouté par la polynucléotide kinase ?
L’ATP.
Que peut incorporer la T4 kinase à l’extrémité 5’ hydroxyle d’ADN ?
Du phosphate radioactif 32P.
Quel est le rôle d’une phosphatase sur une extrémité 5’ monophosphate d’acide nucléique ?
Elle hydrolyse la liaison phosphoester et libère un ion phosphate.
Quelle conséquence a l’action d’une phosphatase sur l’activité des ligases ?
Elle empêche l’action des ligases.
Que fait une ligase entre deux molécules d’ADN ?
Elle reconstitue la liaison phosphodiester entre 3’-OH et 5’-P.
Qu'est-ce qu'une polymérase synthétise et dans quel sens ?
Une polymérase synthétise un acide nucléique par copie complémentaire et antiparallèle dans le sens 5’ vers 3’.
Quelle activité distingue une ADN polymérase ADN dépendante d'une ARN polymérase ADN dépendante ?
L'ADN polymérase ADN dépendante copie une matrice d’ADN en ADN, l'ARN polymérase ADN dépendante copie une matrice d’ADN en ARN.
Que copie une ADN polymérase ARN dépendante ?
Elle copie une matrice d’ARN en ADN.
Quelles activités possède naturellement l’ADN polymérase I d’Escherichia coli ?
Elle possède une activité polymérase 5’→3’ et des activités exonucléases 5’→3’ et 3’→5’.
Quelle activité est absente dans le fragment de Klenow par rapport à l’ADN polymérase I ?
Le fragment de Klenow est privé de l’activité exonucléase 5’→3’.
Quelles activités conserve le fragment de Klenow ?
Il conserve les activités polymérase 5’→3’ et exonucléase 3’→5’.
Quelles sont les caractéristiques thermiques de la Taq polymérase ?
Elle est thermostable à 95 °C, s’active dès 65 °C et a un optimum d’activité à 72 °C.
Quel est le rôle de la transcriptase inverse dans la RT-PCR ?
Elle synthétise un ADN complémentaire à partir d’un ARN simple brin pour étudier l’expression des gènes.
Qu'est-ce que l'électrophorèse en gel sépare ?
Les fragments d'acides nucléiques chargés négativement selon leur taille.
Comment migrent les fragments d'acides nucléiques les plus petits dans un gel ?
Ils migrent plus rapidement et plus loin entre les pores.
De quoi dépend la taille des pores du gel ?
De sa concentration et de sa réticulation.
Quelles sont les étapes du transfert de type blot ?
Électrophorèse, transfert par aspiration, puis fixation sur membrane.
À quels types de molécules correspondent Southern, Northern et Western-Blot ?
Southern-Blot pour ADN, Northern-Blot pour ARN, Western-Blot pour protéines.
Quelle différence existe-t-il entre une sonde chaude et une sonde froide ?
La sonde chaude contient un radioélément, la sonde froide un marqueur non radioactif.
Pourquoi une sonde liée à une haptène permet-elle une révélation indirecte ?
Car l’haptène est reconnu par un anticorps marqué fluorescent, radioactif ou coloré.
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1. Quelle est la principale différence entre des tissus intacts et une culture cellulaire comme sources de cellules ?
2. Quelle méthode peut contribuer au fractionnement cellulaire afin de libérer les acides nucléiques emprisonnés dans les cellules ?
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