Fiche de révision : Antibiogramme et sensibilité bactérienne

📋 Plan du Cours

1. Principes de l’antibiogramme
2. Antibiotiques et effets bactériens
3. Catégories cliniques de sensibilité
4. CMI et méthode de dilution
5. Antibiogramme standard par diffusion
6. Interprétation et seuils critiques
7. Incertitude technique et résultats NC
8. Méthodes complémentaires de détection

📖 1. Principes de l’antibiogramme

🔑 Notions clés & Définitions

• Antibiogramme : Examen de laboratoire qui évalue la sensibilité d’une bactérie aux antibiotiques après isolement et identification de la bactérie à partir d’un prélèvement biologique.

📝 Points essentiels

• L’antibiogramme peut prendre trois formes :
  • qualitatif
  • semi-quantitatif
  • fondé sur la biologie moléculaire pour détecter des gènes ou des mutations de résistance connus

📖 2. Antibiotiques et effets bactériens

🔑 Notions clés & Définitions

• Antibiotique : Substance produite par des microorganismes ou obtenue par synthèse chimique, dotée d’une activité antibactérienne spécifique à faible dose.

★ À maîtriser

📌 Un effet bactériostatique ralentit ou arrête la croissance bactérienne, tandis qu’un effet bactéricide tue les bactéries.

Compléments

• Selon sa concentration, un même antibiotique peut être sans effet sur une souche, ralentir sa croissance ou tuer la bactérie.

💡 Astuce mémo

Bactériostase freine la croissance ; bactéricidie tue la bactérie.

📖 3. Catégories cliniques de sensibilité

🔑 Notions clés & Définitions

• Sensibilité : Bactérie sur laquelle l’antibiotique agit à dose usuelle, c’est-à-dire à la posologie standard, avec une forte probabilité de succès thérapeutique.
• Résistance : Bactérie pour laquelle l’antibiotique présente une forte probabilité d’échec thérapeutique même à la posologie maximale recommandée.
• Sensibilité à forte exposition : Bactérie pour laquelle la probabilité de succès thérapeutique est élevée si l’antibiotique est administré à forte posologie ou se concentre fortement au site infectieux.

★ À maîtriser

• La catégorie clinique d’un antibiotique dépend des posologies et du niveau d’exposition de la bactérie à l’antibiotique au site infectieux.

Compléments

• Une forte exposition à l’antibiotique peut être obtenue par une posologie élevée par voie générale ou par une forte concentration au site infectieux, notamment dans les urines, après administration intraveineuse ou traitement local.

📖 4. CMI et méthode de dilution

🔑 Notions clés & Définitions

• Concentration minimale inhibitrice : Plus faible concentration d’antibiotique qui empêche toute culture visible de la bactérie et correspond à un effet bactériostatique.

• Concentration minimale bactéricide : Plus faible concentration d’antibiotique qui laisse survivre 0,01 % ou moins des bactéries et correspond à un effet bactéricide.

📝 Points essentiels

• La méthode de référence pour déterminer la CMI consiste à inoculer une même quantité de bactérie dans des tubes de bouillon contenant des concentrations croissantes d’antibiotique, puis à incuber 18 heures à 35 °C et à retenir la plus faible concentration sans croissance visible.

💡 Astuce mémo

Concentrations croissantes, incubation, absence de trouble : repérer la CMI.

📖 5. Antibiogramme standard par diffusion

★ À maîtriser

• L’antibiogramme standard par diffusion est réalisé sur gélose Mueller-Hinton selon des paramètres standardisés.

📌 Le milieu de culture doit permettre la croissance de nombreuses bactéries, ne pas contenir d’inhibiteurs des antibiotiques et présenter un pH compris entre 7,2 et 7,4.

• L’antibiotique du disque se solubilise dans l’eau de la gélose, diffuse d’abord en profondeur puis latéralement, et forme un gradient de concentration maximal au niveau du disque.

📌 La suspension bactérienne doit être préparée dans de l’eau physiologique stérile à partir d’une culture jeune et pure, ajustée à une densité précise au densitomètre, puis ensemencée dans les 15 minutes suivant sa préparation.

Compléments

• En France, le CA-SFM travaille avec l’EUCAST pour harmoniser les règles de réalisation et d’interprétation des antibiogrammes entre les pays européens.

• Le CA-SFM publie chaque année un recueil de recommandations pour la réalisation et l’interprétation des antibiogrammes.

• Un excès de calcium et de magnésium inhibe l’action des polymyxines.

• Un pH trop acide augmente l’activité des bêta-lactamines, tandis qu’un milieu alcalin favorise l’activité des aminosides et des macrolides.

• L’ensemencement est réalisé par écouvillonnage ou par inondation afin d’obtenir après incubation des colonies distinctes mais jointives.

• Les disques imprégnés d’une quantité précise d’antibiotique doivent être déposés uniformément sur la gélose, à distance du bord de la boîte et les uns des autres pour éviter le chevauchement des zones d’inhibition.

💡 Astuce mémo

Autour du disque, un halo où la concentration diminue en s’éloignant.

📖 6. Interprétation et seuils critiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Concentrations critiques : Seuils fondés sur des données pharmacologiques, microbiologiques et cliniques qui permettent de classer une souche en S, SFE ou R.

★ À maîtriser

• Une souche est sensible (S) lorsque sa CMI est inférieure ou égale à la concentration critique inférieure (CMI ≤ CCInf).

• Une souche est sensible à forte exposition lorsque sa CMI est supérieure à CCInf et inférieure ou égale à CCSup (CCInf < CMI ≤ CCSup).

• Une souche est résistante (R) lorsque sa CMI est supérieure à la concentration critique supérieure (CMI > CCSup).

Compléments

• Le diamètre d’inhibition permet d’estimer la CMI, et le CA-SFM définit pour chaque antibiotique une correspondance entre les concentrations critiques et les diamètres critiques.

• La pureté de l’inoculum peut être vérifiée en examinant le tapis bactérien.

💡 Astuce mémo

Sous le seuil inférieur : S ; entre les seuils : SFE ; au-dessus du seuil supérieur : R.

📖 7. Incertitude technique et résultats NC

🔑 Notions clés & Définitions

• Zone d’incertitude technique : Plage proche des valeurs critiques où la mesure du diamètre d’inhibition ou de la CMI est peu reproductible et risque d’entraîner une erreur de catégorisation clinique.

📝 Points essentiels

• Une mesure située dans une ZIT peut conduire le laboratoire à rendre un résultat NC, pour « non catégorisable ».

• En cas de ZIT, le biologiste peut réaliser un test complémentaire, comme une CMI par gradient ou un E-test, afin de tenter de lever le doute.

• Pour un résultat en ZIT, le laboratoire peut d’abord signaler « CMI sur demande » ; le clinicien décide ensuite de demander ou non une détermination de CMI selon le prélèvement, le nombre d’antibiotiques actifs restants et la place de l’antibiotique dans l’arsenal thérapeutique.

📌 Si le clinicien ne demande pas la détermination de CMI, le résultat de l’antibiotique est rendu « non catégorisable » (NC ou N).

💡 Astuce mémo

Mesure proche d’un seuil → reproductibilité fragile → résultat NC et tests complémentaires.

📖 8. Méthodes complémentaires de détection

★ À maîtriser

• L’antibiogramme semi-quantitatif par E-test permet une détermination directe de la CMI.

• La biologie moléculaire peut détecter des gènes ou des mutations de résistance connus.

Compléments

• La présence du gène mecA chez Staphylococcus aureus indique une résistance à l’oxacilline et fait considérer le microorganisme comme résistant à la plupart des bêta-lactamines, quels que soient les résultats de l’antibiogramme.

📊 Tableaux de synthèse

Catégories cliniques selon la CMI