Fiche de révision : Colorations spéciales en histologie

📋 Plan du Cours

1. Principes des colorations histochimiques
2. Applications des colorations histochimiques
3. Colorations histoenzymatiques musculaires
4. Principes de l’immunohistochimie
5. Limites et amplification immunohistochimiques
6. Cibles antigéniques en immunohistochimie
7. Applications tumorales de l’immunohistochimie
8. Hybridation in situ des acides nucléiques

📖 1. Principes des colorations histochimiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Coloration histochimique : Mise en évidence de composés chimiques particuliers sur une coupe histologique par la production d’un précipité coloré.

★ À maîtriser

• 🔄 La réaction de Perls suit ces étapes. :
  1. L’HCl libère in situ le fer sous forme de FeCl₃.
  2. Le ferrocyanure de potassium réagit avec le FeCl₃.
  3. La réaction produit un précipité insoluble bleu de ferrocyanure ferrique.

Compléments

📐 Formule - La réaction de Perls s’écrit $4FeCl_3 + 3K_4[Fe(CN)_6] \rightarrow Fe_4[Fe(CN)_6]_3 + 12KCl$.

💡 Astuce mémo

Réaction chimique → précipité coloré

📖 2. Applications des colorations histochimiques

★ À maîtriser

• La coloration de Perls met en évidence le fer de l’hémosidérine, qui apparaît bleu, notamment dans les ganglions lymphatiques et le foie.

• La méthode de Gordon-Sweet utilise une imprégnation argentique pour visualiser les fibres de réticuline et préciser l’architecture des organes.

📌 Dans le foie normal, le réseau de réticuline est régulier et entoure une couche d’hépatocytes, tandis que dans le foie pathologique le réseau est irrégulier et les hépatocytes forment plusieurs couches.

📌 Le trichrome de Masson met en évidence un dépôt glomérulaire de collagène, tandis que le rouge Congo associé à la lumière polarisée met en évidence un dépôt de substance amyloïde.

• La coloration de Ziehl-Neelsen applique de la fuchsine, puis décolore la lame avec des solutions acido-alcooliques, notamment éthanol-HCl, tandis que les complexes formés avec les acides mycoliques des bacilles résistent à la décoloration.

• La coloration de Ziehl-Neelsen révèle en rouge les bacilles acido-alcoolo-résistants, notamment les mycobactéries.

• La coloration PAS oxyde les groupes glycol en aldéhydes avec l’acide périodique, puis le réactif de Schiff colore les aldéhydes en rouge.

Compléments

• Dans le foie, la coloration de Perls colore en bleu le pigment ferrique et oriente vers une hémochromatose.

• Dans le foie, la rhodanine colore en rouge le cuivre et oriente vers la maladie de Wilson.

• Dans le foie, la coloration de Hall colore en vert la bilirubine et révèle une stase biliaire.

• La coloration PAS met en évidence le glycogène, l’acide hyaluronique et les glycoprotéines, ainsi que des filaments mycéliens et certains champignons comme les dermatophytes et les cryptococques.

• La coloration de Whartin-Starry utilise des sels d’argent pour mettre en évidence l’argyrophilie de certaines bactéries spiralées.

• Le bleu de toluidine permet d’identifier des mastocytes, y compris dans des mastocytomes peu différenciés.

📖 3. Colorations histoenzymatiques musculaires

🔑 Notions clés & Définitions

• Coloration histoenzymatique : Mise en évidence d’une activité enzymatique particulière dans une coupe histologique par la production d’un précipité coloré en présence d’un substrat et d’un révélateur.

★ À maîtriser

• Comme la fixation dénature les protéines, notamment les enzymes, les colorations histoenzymatiques utilisent des coupes de tissus congelés rapidement et brutalement.

• Dans le muscle, les cellules de type I sont lentes et à activité oxydative, tandis que les cellules de type II sont rapides et à activité glycolytique.

• À pH acide 4,3, l’ATPase colore en noir les cellules musculaires de type I et laisse claires celles de type II.

Compléments

📌 À pH basique 9,4, l’ATPase colore en noir les cellules musculaires de type II et laisse claires celles de type I.

• Dans l’exemple de biopsie musculaire, les cellules de type I sont petites et atrophiées, tandis que les cellules de type II sont grandes et normales.

💡 Astuce mémo

ATPase acide : type I noire ; ATPase basique : type II noire

📖 4. Principes de l’immunohistochimie

🔑 Notions clés & Définitions

• Immunohistochimie : Mise en évidence d’un antigène particulier sur une coupe tissulaire par visualisation d’un signal généré par un anticorps spécifique de cet antigène.

★ À maîtriser

• Le formol peut former des ponts méthylènes entre des acides aminés basiques, entraînant la destruction ou le masquage d’épitopes conformationnels associés à la structure tertiaire des protéines.

Compléments

• Dans l’exemple présenté, l’antigène recherché est le collagène de type IV et le signal immunohistochimique est un précipité marron.

📖 5. Limites et amplification immunohistochimiques

★ À maîtriser

📌 La méthode immunohistochimique directe est très rapide mais sans amplification, avec un signal indiqué comme un antigène pour un signal.

📌 La méthode avidine-biotine-complexe est lente mais amplifie fortement le signal, avec environ 1 000 signaux pour un antigène.

Compléments

• La méthode avidine-biotine-complexe utilise un anticorps primaire de souris ou de lapin, un anticorps secondaire de chèvre anti-souris ou anti-lapin couplé à la biotine, puis l’avidine et des générateurs de signal.

💡 Astuce mémo

Directe : rapide sans amplification ; avidine-biotine : lente et amplificatrice

📖 6. Cibles antigéniques en immunohistochimie

★ À maîtriser

• L’immunohistochimie peut identifier des antigènes spécifiques d’un type cellulaire, comme CD3, qui marque les lymphocytes T dans l’exemple de cellules tumorales.

• Ki 67 est un antigène nucléaire spécifique des cellules en division et sert à repérer leur activité proliférative.

Compléments

• L’immunohistochimie peut détecter des antigènes spécifiques d’agents infectieux, notamment des virus, des bactéries et des parasites.

📖 7. Applications tumorales de l’immunohistochimie

★ À maîtriser

• Un anticorps anti-kératine, spécifique des cellules épithéliales, permet de détecter un petit amas de cellules tumorales dans un ganglion d’architecture normale et de rechercher des micrométastases.

📌 Le CD79a identifie le phénotype B et le CD3 identifie le phénotype T pour typer un lymphome immunoblastique.

📌 Dans l’étude d’Abadie, les mastocytomes de grade II avec un index Ki 67 inférieur à 10 % ont une survie à deux ans de 88 %, contre 34 % lorsque l’index dépasse 10 %. - J.Abadie, MA.Amardeilh, M.Delverdier, Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen and Ki67 in mast cell tumors from dogs, 1999

Compléments

• Dans le grading de Patnaik, les mastocytomes cutanés du chien sont classés en trois groupes selon cinq critères histologiques, puis les groupes sont suivis pendant quatre ans. - A.K. Patnaik,WJ Ehler, EG MacEwen, Canine Cutaneous Mast Cell Tumor: Morphologic Grading and Survival Time in 83 dogs, 1984

• Dans l’étude de Patnaik, les groupes I, II et III représentent respectivement 36 %, 43 % et 20 % des chiens, avec des survies à quatre ans de 83 %, 44 % et 6 %. - A.K. Patnaik,WJ Ehler, EG MacEwen, Canine Cutaneous Mast Cell Tumor: Morphologic Grading and Survival Time in 83 dogs, 1984

• Abadie et ses collaborateurs ont étudié en 1999 le Ki 67 dans 60 mastocytomes cutanés canins de grade II, répartis selon un index Ki 67 inférieur ou supérieur à 10 %, avec un suivi de deux ans. - J.Abadie, MA.Amardeilh, M.Delverdier, Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen and Ki67 in mast cell tumors from dogs

📖 8. Hybridation in situ des acides nucléiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Hybridation in situ : Localisation sur des coupes tissulaires de séquences spécifiques d’ADN ou d’ARN à l’aide de sondes marquées.

★ À maîtriser

• L’hybridation in situ comprend la dénaturation des acides nucléiques, puis l’hybridation avec une sonde spécifique marquée qui permet de détecter la séquence recherchée.

Compléments

• L’hybridation in situ peut être utilisée pour rechercher un virus, comme dans l’exemple d’une cellule positive à l’EBV dans un carcinome mammaire. - A Trabelsi, annales de Biologie Clinique, 2008

📊 Tableaux de synthèse

Colorations des pigments hépatiques

Index Ki 67 et survie des mastocytomes