★ À maîtriser
La fluorescence repose sur une excitation et une émission à deux pics spectraux différents.
Le microscope confocal utilise un laser et observe un point focal, puis permet de reconstituer une image en trois dimensions à partir de coupes.
La microscopie électronique utilise des électrons comme source d’excitation et donne accès à l’ultrastructure.
📌 Le MET permet d’observer l’ultrastructure, tandis que le MEB permet d’observer la surface et sa granulosité.
Compléments
La chromatine correspond à la compaction de l’ADN.
Le gain amplifie le signal d’entrée et augmente la luminosité de l’image.
L’offset permet d’enlever le bruit de fond de l’image.
Le DAPI est excité dans l’ultraviolet et émet une fluorescence bleue.
Le MET révèle l’ultrastructure interne, tandis que le MEB montre la surface.
1. Lorsqu’un fluorophore est éclairé, quelle relation entre ses deux pics spectraux permet d’observer sa fluorescence ?
2. Une équipe veut obtenir une représentation tridimensionnelle d’un échantillon en enregistrant des plans successifs autour d’un point focal. Quel microscope convient ?
3. Pour étudier l’ultrastructure d’un échantillon, un laboratoire choisit une microscopie dont la source d’excitation est constituée d’électrons. Quelle méthode répond à ces deux critères ?
Quels pics spectraux caractérisent la fluorescence ?
Un pic d’excitation et un pic d’émission à des longueurs d’onde différentes.
Quelle source lumineuse le microscope confocal utilise-t-il ?
Un laser.
Qu’utilise la microscopie électronique comme source d’excitation ?
Des électrons.
Quelle structure le MET permet-il d’observer ?
L’ultrastructure.
Comment la cytométrie de flux fait-elle passer les cellules ou particules dans un faisceau laser ?
Une par une, en suspension.
À quelle propriété cellulaire renseigne la lumière diffusée vers l’avant en cytométrie de flux ?
À la taille des cellules.
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