1. Une équipe veut isoler un gène précis par clonage. Quelle suite d’opérations respecte le principe de cette méthode ?
2. Sur un milieu contenant X-Gal et IPTG, une bactérie porte un plasmide dans lequel un fragment d’ADN interrompt la séquence codant le peptide α. Quelle couleur aura sa colonie dans le criblage lacZα ?
3. Un laboratoire compare un plasmide naturel de 120 kpb présent à faible nombre de copies avec un vecteur artificiel de 8 kpb à haut nombre de copies. Quelle interprétation correspond aux caractéristiques générales de ces deux catégories ?
Que permet de purifier le clonage, et sous quelle forme ?
Des gènes ou fragments d’ADN sous forme de molécules caractérisées et disponibles en grande quantité.
Comment les plasmides naturels se distinguent-ils des vecteurs bactériens usuels ?
Les plasmides naturels peuvent dépasser 100 kpb, avoir peu de sites uniques de restriction et être peu copiés, contrairement aux vecteurs usuels, généralement artificiels, de moins de 10 kpb et très copiés.
Quels éléments portent les vecteurs plasmidiques bactériens ?
Une origine de réplication, un marqueur de sélection et au moins un site de restriction unique.
Quelles utilisations du clonage sont courantes ?
La construction de banques, le séquençage des génomes, l’analyse ou la modification de séquences et l’expression hétérologue de gènes d’intérêt.
Comment le marqueur URA3 sauvage sélectionne-t-il les levures transformées ura3 ?
Il leur permet de croître en milieu minimum sans uracile.
Où les transcrits eucaryotes sont-ils épissés ?
Dans le noyau.
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