★ À maîtriser
La première voie d’extraction consiste à isoler l’ADN nucléaire, à le fragmenter avec des enzymes de restriction, puis à repérer le gène d’intérêt avec une sonde d’ARN radioactive.
La seconde voie consiste à extraire l’ARNm d’une cellule qui exprime le gène recherché, à produire un ADN simple brin par transcription inverse, puis à synthétiser le second brin avec l’ADN polymérase.
Compléments
ADN génomique extrait du noyau, ARNm extrait du cytoplasme
1. Quelles opérations permettent d’insérer le gène d’intérêt et un gène de résistance dans un plasmide bactérien ?
2. Quel rôle joue le gène de résistance intégré au plasmide recombinant lors de la sélection des bactéries ?
3. Pour obtenir un ADN double brin à partir de l’ARNm d’une cellule exprimant le gène recherché, quelle succession d’étapes faut-il suivre ?
Comment repère-t-on le gène d’intérêt après fragmentation de l’ADN nucléaire ?
Avec une sonde d’ARN radioactive.
Comment les enzymes de restriction et les ligases construisent-elles un plasmide recombinant ?
Les enzymes de restriction traitent le plasmide bactérien et les fragments, puis les ligases insèrent le gène d’intérêt et un gène de résistance.
Que produit la seconde voie d’extraction du gène d’intérêt ?
Une copie d’ADN double brin codant pour le gène d’intérêt.
Où se réalise la synthèse in vitro d’une protéine ou d’une hormone ?
En dehors de la cellule ou de la glande de l’organisme.
Comment les plasmides recombinants pénètrent-ils dans les bactéries Escherichia coli ?
Elles les absorbent spontanément sous l’action de la chaleur.
Quelles bactéries persistent après culture avec l’agent de sélection ?
Les bactéries transgéniques porteuses du gène protecteur.
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