Fiche de révision : Qualité pharmaceutique et chromatographie

📋 Plan du Cours

1. Contrôle et qualité du médicament
2. Pharmacopée et monographies
3. Solutions et concentrations
4. Principes de chromatographie
5. Chromatogramme et écoulement
6. Rétention et sélectivité
7. Efficacité des colonnes
8. Résolution et forme des pics
9. Méthodes de quantification

📖 1. Contrôle et qualité du médicament

🔑 Notions clés & Définitions

• Principe actif : Apporte une activité thérapeutique.
• Substance active : Substance qui apporte une activité, par exemple une activité de conservation.

★ À maîtriser

• 🔄 La fabrication et son contrôle suivent les étapes suivantes :
  1. Matière première (MP)
  2. Produit semi-ouvré (PSO)
  3. Produit fini (PF)

📌 Une matière première contrôlée est libérée si elle est conforme aux spécifications imposées ; le contrôle est obligatoire et aboutit à un résultat conforme ou non conforme.

Compléments

• Le contrôle pharmaceutique s’appuie sur les référentiels BPF et BPL et mobilise notamment l’assurance qualité, les laboratoires de contrôle et de développement, ainsi que le dossier d’AMM/CTD.

• L’échantillothèque conserve un échantillon de chaque lot de matière première ou de principe actif utilisé afin de pouvoir le retrouver ultérieurement.

💡 Astuce mémo

MP → produit semi-ouvré → produit fini : le contrôle suit la fabrication.

📖 2. Pharmacopée et monographies

★ À maîtriser

• La Pharmacopée européenne, dans sa 11e édition, est un ouvrage réglementaire obligatoire en France et en Europe et évolue tous les trois mois.

• Une monographie peut indiquer le nom latin de la substance, sa structure chimique, sa masse molaire relative sans unité et son numéro CAS, qui identifie sans équivoque la substance.

📌 Pour une teneur spécifiée de 98,0 % à 102,0 % sur substance desséchée, seul le résultat final est arrondi au nombre de décimales indiqué par la Pharmacopée, sans arrondi des résultats intermédiaires.

📌 Une substance desséchée est dépourvue de solvant, tandis qu’une substance anhydre est dépourvue d’eau.

Compléments

• À partir de 2026, la Pharmacopée européenne est disponible en ligne afin de rester constamment à jour.

• Une monographie de la Pharmacopée européenne concerne principalement le contrôle des matières premières, même si certains produits finis commencent à y apparaître.

📖 3. Solutions et concentrations

🔑 Notions clés & Définitions

• Solution : Mélange homogène à une seule phase, formé par la dissolution d’un ou plusieurs solutés dans un solvant, où les espèces dissoutes sont solvatées et dispersées sans particules en suspension.
• Miscibilité : Capacité de deux liquides à se mélanger.
• Équivalent : Notion relative à une réaction donnée, notamment acide-base ou oxydoréduction.

★ À maîtriser

• Le pKa marque la limite entre les formes ionisée et non ionisée d’une molécule.

• La normalité dépend de la réaction considérée : HCl 1 N équivaut à 1 M, tandis que H₂SO₄ 1 N équivaut à 1/2 M.

Compléments

• La Pharmacopée européenne utilise notamment les pourcentages masse/masse et les parties par million (ppm) pour exprimer des concentrations.

💡 Astuce mémo

Molarité : moles par litre ; normalité : équivalents par litre selon la réaction.

📖 4. Principes de chromatographie

🔑 Notions clés & Définitions

• Sélectivité : Capacité d’un système chromatographique à séparer deux molécules de structures proches.

★ À maîtriser

• En chromatographie, les constituants de l’échantillon sont entraînés par la phase mobile à travers la phase stationnaire, où leurs interactions différentielles permettent leur séparation, puis un détecteur peut produire un signal.

📌 Avant l’analyse d’un échantillon, un critère de conformité du système doit être vérifié ; cette vérification est réglementairement obligatoire.

Compléments

• La chromatographie peut utiliser une phase gazeuse, une phase liquide sur colonne ou couche mince, ou une phase supercritique, cette dernière n’étant pas utilisée par la Pharmacopée européenne pour le contrôle du médicament.

• La séparation chromatographique dépend des interactions des molécules avec les phases mobile et stationnaire, qui peuvent notamment être liées à la polarité ou aux interactions électrostatiques.

💡 Astuce mémo

Séparer ≠ détecter : les deux fonctions sont distinctes et doivent être compatibles.

📖 5. Chromatogramme et écoulement

★ À maîtriser

• Un pic correspondant à un soluté non retenu apparaît au temps mort, également associé au volume mort V₀.

• Un chromatogramme permet l’analyse quantitative par la surface des pics et l’analyse qualitative par l’identification des substances.

Compléments

• La réponse chromatographique dépend du détecteur utilisé, par exemple une mesure d’absorbance UV ou d’intensité de fluorescence.

• La loi de Darcy décrit la perte de charge lors de l’écoulement de la phase mobile dans la colonne, et la formule n’est pas à connaître pour l’examen du cours.

• À débit comparable, une phase mobile plus visqueuse entraîne une pression plus élevée, et la perte de charge est beaucoup plus importante en chromatographie liquide haute performance qu’en chromatographie en phase gazeuse.

📖 6. Rétention et sélectivité

🔑 Notions clés & Définitions

• Rétention relative : Rapport entre un temps de rétention et un temps de référence ; elle est largement utilisée par la Pharmacopée européenne.
• Facteur de capacité : Grandeur relative de rétention utilisée en chromatographie.

★ À maîtriser

📌 Le rapport de sélectivité α indique une séparation lorsque α > 1, tandis que α = 1 indique l’absence de séparation.

Compléments

📌 Les grandeurs relatives de rétention dépendent moins des conditions opératoires que les temps de rétention absolus, qui varient avec ces conditions.

💡 Astuce mémo

α > 1 : séparation ; α = 1 : absence de séparation.

📖 7. Efficacité des colonnes

🔑 Notions clés & Définitions

• Nombre de plateaux théoriques : Représente l’efficacité d’une colonne chromatographique : plus il est élevé, meilleure est la séparation.

• HEPT : Grandeur d’efficacité qui doit être aussi faible que possible.

📝 Points essentiels

• Le nombre de plateaux se calcule selon une formule de la Pharmacopée européenne, distincte de la formule de la Pharmacopée américaine ; ces formules ne sont pas à connaître pour l’examen.

• Des pics évasés ou non gaussiens diminuent l’efficacité apparente de la séparation.

💡 Astuce mémo

Plus de plateaux → meilleure séparation ; HEPT plus faible → efficacité accrue.

📖 8. Résolution et forme des pics

🔑 Notions clés & Définitions

• Résolution : Mesure la séparation entre deux molécules et dépend de l’efficacité, de la sélectivité et du facteur de capacité.

★ À maîtriser

📌 Une résolution de 1,5 correspond à une bonne séparation avec retour à la ligne de base avant le pic suivant.

• L’effet de traînée étire le pic vers l’arrière lorsque la phase stationnaire est saturée par une concentration d’échantillon trop importante.

Compléments

• Le rapport pic/vallée, utilisé par la Pharmacopée européenne lorsque la résolution ne peut pas être calculée, constitue une solution de remplacement pour évaluer une séparation insuffisante.

• L’effet de front déforme le pic vers l’avant lorsque la rétention est trop importante et que le chromatogramme n’avance pas assez vite.

💡 Astuce mémo

La traînée s’étale vers l’arrière ; le front se déforme vers l’avant.

📖 9. Méthodes de quantification

★ À maîtriser

📌 La méthode analytique permet d’obtenir un signal, tandis que la méthode quantitative convertit ce signal en concentration ou en masse.

• En chromatographie, la surface ou la hauteur d’un pic est liée à la quantité de soluté ayant traversé le détecteur.

Compléments

• La plupart des détecteurs utilisés sont différentiels et mesurent la variation d’une grandeur proportionnelle à la concentration du soluté dans l’effluent.

💡 Astuce mémo

La méthode analytique produit le signal ; la méthode quantitative le convertit en quantité.