QCM : Clonage moléculaire et analyse de l’expression — 14 questions

Explication

L’ADNc X est obtenu à partir de l’ARN messager qui code la protéine X humaine, et il possède des extrémités franches. Le plasmide recombinant sert de vecteur de clonage, mais il n’est pas l’origine de l’ADNc.

Explication

Le clonage bactérien permet au vecteur recombinant de se répliquer et de se multiplier avec les bactéries qui le portent. La transcription produit un ARN, mais elle ne constitue pas le mécanisme d’amplification du vecteur.

Explication

Deux stratégies sont possibles : utiliser les sites HindIII et EcoRV, ou utiliser les sites HindIII et BamHI. Les autres combinaisons ne correspondent pas aux stratégies indiquées pour cet ADNc et ce vecteur.

Explication

Une enzyme de restriction est une endonucléase qui coupe les deux brins d’une molécule d’ADN à des sites précis. La ligase relie les extrémités, tandis que la réplication et la détection relèvent d’autres mécanismes.

Explication

Un plasmide est une molécule d’ADN bactérienne circulaire à double brin qui peut se répliquer de manière autonome grâce à des séquences particulières. Les autres descriptions correspondent à de l’ARN, à un fragment d’ADN incomplet ou à une enzyme.

Explication

Le promoteur permet l’expression de l’ADN cloné dans un plasmide d’expression. Le gène de sélection sert à sélectionner les bactéries porteuses du plasmide, tandis que les sites de restriction facilitent l’insertion de l’ADN.

Explication

Un plasmide d’expression est un vecteur de clonage auquel on a ajouté un promoteur afin de permettre l’expression de l’ADN inséré. L’ajout du promoteur ne supprime ni la réplication autonome ni le principe de sélection du vecteur.

Explication

La taille est estimée en comparant la distance de migration du fragment à celles de fragments marqueurs grâce à une droite étalon semi-logarithmique. La distance seule ne fournit pas directement une taille fiable, car elle dépend notamment des conditions de migration.

Explication

La carte de restriction est construite à partir des tailles de fragments issues de digestions simples, doubles et triples, puis les sites de restriction, l’ATG initiateur et le codon STOP sont positionnés. La migration du plasmide non digéré et le nombre de bactéries ne fournissent pas ces informations structurales.

Explication

Les promoteurs T7 et Sp6 sont reconnus par les ARN polymérases correspondantes des bactériophages T7 et Sp6. Les ADN polymérases bactériennes interviennent dans la réplication de l’ADN, et non dans la reconnaissance spécifique de ces promoteurs.

Explication

La transcription in vitro utilise l’ARN polymérase T7 et les NTP pour produire un ARN à partir de l’ADNc cloné. La réplication bactérienne produit des copies d’ADN plasmidique, ce qui correspond à un processus différent.

Explication

Le Northern blot détecte un ARN spécifique par hybridation avec une sonde complémentaire marquée. Le Southern blot repose sur une analyse de l’ADN et ne correspond donc pas à la détection d’ARN.

Explication

La préhybridation sature les sites non spécifiques de la membrane avant l’ajout de la sonde. L’hybridation intervient ensuite pour permettre la fixation de la sonde sur sa séquence complémentaire.

Explication

La synthèse de la sonde nécessite une linéarisation en aval de l’insert, suivie d’une transcription Sp6 avec ATP, CTP, GTP, UTP et une fraction d’UTP couplé à la digoxigénine. Une ADN polymérase, des acides aminés ou des nucléotides exclusivement radioactifs ne correspondent pas à ce protocole.