★ À maîtriser
La PCR à terminaison de chaîne utilise l’ADN d’intérêt comme matrice et un faible rapport de ddNTP avec les dNTP normaux ; l’incorporation aléatoire d’un ddNTP arrête l’élongation et produit des fragments terminés à différentes longueurs.
Les ddNTP ne possèdent pas le groupe 3′-OH nécessaire à la formation de la liaison phosphodiester avec le nucléotide suivant.
Compléments
1. Quel est l’objectif principal du séquençage Sanger ?
2. Lors d’une PCR à terminaison de chaîne, un mélange contient l’ADN d’intérêt comme matrice, des dNTP normaux et une faible proportion de ddNTP. Que produit l’incorporation aléatoire de ces ddNTP ?
3. Une ADN polymérase incorpore un ddNTP au bout d’un brin en croissance. Quelle propriété de ce nucléotide empêche l’ajout du nucléotide suivant ?
Quelle attribution est associée au séquençage Sanger ?
Frederick Sanger, 1977.
Que permet de déterminer le séquençage Sanger ?
La séquence de nucléotides de l’ADN.
Quel autre nom porte le séquençage Sanger ?
La méthode de terminaison de chaîne.
Quelle matrice la PCR à terminaison de chaîne utilise-t-elle ?
L’ADN d’intérêt.
Que provoque l’incorporation aléatoire d’un ddNTP pendant l’élongation ?
L’arrêt de l’élongation et la production de fragments de longueurs différentes.
Quel groupe les ddNTP ne possèdent-ils pas ?
Le groupe 3′-OH.
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