Propriétés et manipulation de l’ADN

📋 Plan du Cours

1. Spectrophotométrie des acides nucléiques
2. Dénaturation et hybridation de l’ADN
3. PCR et détection des mutations
4. Électrophorèse sur gel d’agarose
5. Enzymes de restriction et clonage
6. Cartes de restriction et Southern blot
7. Séquençage de Sanger

📖 1. Spectrophotométrie des acides nucléiques

🔑 Notions clés & Définitions

• Température de fusion : Température à laquelle 50 % des molécules sont sous forme double brin.
• Effet hyperchrome : Augmentation de l’absorption de la lumière ultraviolette par l’ADN lors de sa dénaturation.

★ À maîtriser

• Les acides nucléiques et les protéines peuvent être quantifiés par spectrophotométrie en mesurant leur absorbance à 260 nm.

📐 Formule - La loi de Beer-Lambert s’écrit $A = \varepsilon \cdot l \cdot c$, où A est l’absorbance, ε le coefficient d’extinction molaire, l le trajet optique et c la concentration.

• À 260 nm, 1 DO correspond à 50 μg/mL pour les acides nucléiques double brin et à 37 μg/mL pour les acides nucléiques simple brin.

Compléments

• Pour une cuve standard, le trajet optique l vaut 1 cm.